前脂肪细胞增殖过程中新的CEBPβ调控基因的筛选和验证.pdfVIP

前脂肪细胞增殖过程中新的C／EBPp调控基因的筛选和验证 中文摘要 肥胖的主要症状是体内脂肪堆积过多和分布不均，并导致体重的增加，是遗 传因素和环境因素共同作用的结果。肥胖的形成包括两方面：一方面是脂肪细胞 脂肪细胞数量的增加是由于脂肪组织中存在的干细胞定向为前脂肪细胞，后者在 一定的环境因素作用下，分化为脂肪细胞。 3T3一L1前脂肪细胞分化模型是广泛被采用的一个细胞模型，用于研究脂肪 细胞发育分化的机理。本研究中3T3-L1前脂肪细胞按标准的诱导方案诱导后可 以完全地分化为成熟的脂肪细胞。当接触抑制的3T3-L1前脂肪细胞被诱导后， 首先进行两轮的克隆扩增使前脂肪细胞数量增加，然后进入终末分化阶段，脂肪 特异性基因表达及甘油三酯的聚集。该细胞模型忠实模拟体内脂肪细胞的发育分 化过程。在诱导过程中转录因子CCAAT／enhancer-binding y 首先被激活转录，然后转录因子C／EBPQ和PPARY诱导表达，C／EBPQ和PPAR B己被证明 控制了包括所有参与脂类代谢和脂肪细胞特异性基因的表达。C／EBP 在前脂肪细胞的扩增和终末分化过程中都起到很重要的作用，C／EBPB可以结合 y，C／EBP 到PPAR Q的启动子上，调控脂肪细胞的终末分化，但C／EBPB在前脂 肪细胞的克隆扩增过程中发挥作用的机理仍不清楚。 本实验室前期的研究发现C／EBPB在前脂肪细胞诱导后迅速表达，但不具有 DNA结合活性，当细胞通过G1／S边界时C／EBPB发生程序性磷酸化获得DNA结合活 性，从而开启目的基因的表达，但是C／EBPB靶基因仍不是很清楚。本研究采用染 B在前脂肪细胞 色质免疫共沉淀结合启动子芯(CHIP—on-chip)技术筛选C／EBP 增殖过程中作用的目的基因，探讨C／EBPB影响前脂肪细胞增殖的机理。 我们采用诱导后20d,时的前脂肪细胞3T3一L1，此时细胞处于有丝分裂克隆阶 段，用抗C／EBPB特异性抗体进行染色质免疫共沉淀；经线性扩增后和含28000 MousePromoter1．OR GeneChip Array芯 个小鼠基因组启动子区的Affymetrix B特异性抗体与无抗体对照比较荧光强度高2倍以上的基因 片杂交，以抗C／EBP 作为C／EBPB调控的候选基因：通过生物信息学分析与细胞周期相关的目的基因， 10个C／EBP§调控的候选靶 并用ChIP—PCR对部分相关基因进行验证。我们共发现1 B 基因，其中基因banp和Trim35与控制细胞周期有关，并得以验证，提示C／EBP 可能通过对基因banp和Trim35的调控影响前脂肪细胞的增殖。 关键词：C／EBP B，染色质免疫共沉淀，启动子芯片，前脂肪细胞增殖。 中图分类号Q344+．14 2 andValidationofNovel Genesin Screening C／EBPl3一Regulated Proliferation Preadipocyte Ab