蓖麻毒蛋白的提纯及杀虫效果研究.pdfVIP

摘 要 蓖麻毒蛋白Ricin是存在于蓖麻种子中的一种毒蛋白，分子量在64000，由 A,B两条肤链基组成，通过二硫键相连。A链是活性链，分子量在31000,B 链分子量在34000，具有凝集素活性，能与半乳糖残基结合。A链通过B链特 异地结合细胞表面的受体，通过经受体介导的内吞方式进入细胞。A链能与核糖 体的60S大亚基结合，通过其特异的N一糖昔酶活性，催化切断60S亚基28SrRNA 中第4234位腺嚓吟与核糖分子之间的糖昔键，这一嗓吟的脱落可导致整个核糖 体的失活，从而影响需核糖体参与的氨基酞-tRNA的结合和肤酸-tRNA的转位过 程，最终导致蛋白质合成障碍，引起细胞的死亡。蓖麻毒素具有强烈的细胞毒性， 因此具有抗肿瘤和开发生物农药的前景。 本文研究了从蓖麻种子中分离纯化蓖麻毒蛋白的方法，对蓖麻籽粗提物和蓖 麻毒蛋白进行了杀虫研究。经硫酸按盐析，亲和层析和凝胶过滤，得到了纯的蓖 麻毒蛋白，在SDS中 ， 显示出分子量在64000左右，存在两个亚基，分 子量分别为31000和34o o 八 目 与文献报道相符合。用蓖麻籽粗提物和毒蛋白对 蚜虫和菜青虫进行毒力测定，结果表明，蓖麻毒蛋白具有一定的触杀毒性，对菜 青虫胃毒活性弱，蓖麻碱具有较强的胃毒，触杀活性.并对菜青虫具有较高的拒 食活性。 关键词:蓖麻毒蛋白 分离纯化 菜青虫 毒性 Abstract Thericinisaplanttoxinthatcanbeisolatedfromcastorbeans(Ricinuscommunis) Theproteintoxinhasamolecularweightofabout64000,whichconsistsoftwo chainslinkedbyadisulfidebond.RicinAchain(RTA)isaribosome-inactivating protein,whosemolecularweightisabout31000.RicinBchainisthebindingsubunit andcanspecificallyrecognizereceptorsonthecellmembrane,whichhaveaterminal galactose.RTBmolecularweightisabout34000.Thericinentersintothecell throughreceptor-mediatedendocytosis.RTAbindstoproteinL3ofribosomal60S subunit,IthasspecificN-glycosidaseactivity,andcancatalyticallycleaveaspecific adenineatthesiteof4234outofthe28SrRNA.Thiscleavageofadeninecanleadto thedisruptionofribosomalfunction,thereby,inhibitstheproteinsynthesis,andthen causethedeathofcells.Forthisreason,ricinhasagoodfutureforapplyingon anti-tumorandbiologicalpesticide. Experimentalmethodsandtechnologyfortheseparationandpurificationofricin fromcastorbeansweredescribedinthispaper.Byammoniumsulfateprecipitation, Sepharose-4Baffinitychromatography,andfollowedbymolecularsievechromato -graphy,purifiedricinwasobtained.Thepurifiedpreparationshowedtwoprotein bandswithrelativemolecularweightsof31000and34000.Effectsofricinand castorbeansrawextractagainstPierisrapae伍innaeus)larvaandMyzwsPersicae (Sulzer)weretested.Theres