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鹿茸及鹿花盘蛋白提取物抑菌比较摘要：目的：研究鹿茸、鹿花盘蛋白提取物对大肠杆菌及溶血性链球菌的抑菌作用，为鹿蛋白抑菌药物开发提供科学依据。方法：针对鹿茸、鹿花盘蛋白采用纸片抑菌法进行两种菌的抑菌试验观察。结果：三种鹿蛋白提取物对两种菌均有抑菌作用（P＜0.001、P＜0.01或P＜0.05），鹿花盘蛋白提取物的抑菌作用较明显。 关键词：鹿茸；鹿花盘；蛋白提取物；抑菌 中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-09-0043-2 鹿茸为鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿密生茸毛的未骨化的幼角，是我国传统中药材，已有2000多年的入药历史。具有壮肾阳、益精血、强筋骨、托疮毒的功能。鹿茸化学成分比较复杂，主要含有氨基酸、蛋白质、激素样物质、多肽类、硫酸软骨素等。[1] 鹿花盘为梅花鹿或马鹿锯茸时，在角基上部留下的茸脚骨化后第2年生茸时的脱落部分。鹿角盘中含有大量的钙磷等化合物，并含有丰富的蛋白质、氨基酸和少量的脂类。[2]鹿花盘具有温补肝肾，强筋壮骨，活血消肿，治腰脊冷痛，阴疽疮疡，乳痈突起，瘀血肿痛等症 [3]。 目前，国内外针对鹿蛋白药理作用研究较深入、系统。文献报道证明鹿茸中所含生物活性肽对各种急慢性炎症具有明显的抑制作用[4]。目前国内外针对鹿蛋白抑菌作用研究报道甚少。本论文主要对驯鹿茸（Velvet Reindeer，VR）梅花鹿茸(Velvet Axis，VA)及梅花鹿花盘(Antler Plate， AP)蛋白质提取物(Protein Extractives， PE)进行两种菌的抑菌试验，通过鹿蛋白质提取物的抑菌效果比较，为鹿蛋白质在抑菌、抗炎方面研究开发高附加值产品奠定前期工作基础。 1 材料与方法 1.1 材料和仪器 1.1.1 材料 鹿茸（驯鹿、梅花鹿）鹿花盘（梅花鹿）：由吉林农业大学生命科学学院提供。大肠杆菌：由吉林农业大学生命科学学院提供。溶血性链球菌：由吉林农业大学食品工程学院提供。兔血：由吉林农业大学动物科学院提供。实验动物：昆明种小鼠，体重22±2g雌雄兼用由吉林大学实验动物中心提供。 1.1.2 试剂与仪器 试剂：sephadex G-50、丙烯酰胺系Fluka产品、甲叉双丙烯酰胺、电子分析天平、超净工作台、立式蒸汽灭菌器等。 1.2 方法 1.2.1 蛋白提取分离方法[3] 1.2.2 蛋白提取工艺流程 鹿茸（驯鹿，梅花鹿）及鹿花盘粉末→滤液→热变性→离心→上清浓缩→柱层析→洗脱→浓缩→鹿茸及鹿花盘蛋白提取物。 1.3菌的培养 1.3.1 培养基组成 大肠杆菌培养基：LB普通琼脂平板；金黄色葡萄球菌培养基：普通琼脂平板培养基:溶血性链球菌培养基：血琼脂培养基。 1.3.2 菌的活化 挑优良菌落接入液体培养基，恒温摇床培养，获得活化菌液，置于冰箱中备用。 1.3.3 鹿茸、鹿花盘蛋白提取物浓度梯度的制备 取相同质量的驯、花鹿茸蛋白及花盘蛋白分别加入等量的水稀释成相同浓度的溶液，采用二倍稀释法将上述溶液配制成11.2mg/ml，5.6mg/ml，2.8mg/ml，1.4mg/ml，0.7mg/ml，0.35mg/ml六种不同浓度。 1.4 抑菌实验 将浸有鹿茸，鹿花盘蛋白提取物递减浓度梯度的滤纸片法(直径为4mm)贴置试验菌琼脂平板上，纸片周围若试验菌生长被抑制，有透明抑菌圈。抑菌圈越大，试验菌对该提取物越敏感。反之，就不敏感。 1.5 统计学处理 统计学处理数据以x±s表示，采用统计学SPSS11.5统计学软件进行分析。 2 结果与分析 将浸有三种鹿蛋白提取物浓度滤纸片贴于两种试验菌琼脂平板置于培养箱中，适宜温度培养后观察抑菌情况，并测量抑菌圈大小，每种鹿蛋白提取液对两种受试菌至少测定2次，结果取其平均值。 2.1 鹿茸、鹿花盘蛋白提取物抑菌实验结果 2.1.1 鹿茸、鹿花盘蛋白提取物对大肠杆菌的抑菌实验结果见表1 由表1抑菌结果表明：驯鹿（梅花）鹿茸及鹿花盘蛋白提取物滤纸片周围有透明圈，说明三种鹿蛋白提取物对大肠杆菌有抑制作用。而且在驯鹿（梅花）鹿茸蛋白提取物浓度为0.35mg/ml时不具有抑菌作用。当三种鹿蛋白提取物浓度在11.2mg/ml时，提取液抑菌效果最佳，抑菌圈净长(减去纸片直径)分别为2.5mm、3mm及5mm，抑菌效果大小依次为鹿花盘＞鹿茸（驯鹿）＞鹿茸（梅花鹿）。经统计分析驯鹿（梅花）鹿茸及鹿花盘蛋白提取物与对照组相比P＜0.001或P＜0.05差异显著。 2.1.2鹿茸、鹿花盘对溶血性链球菌的抑菌试验结果见表2 由表2抑菌结果表明：鹿茸，鹿花盘对溶血性链球菌均有抑制作用。而且驯鹿茸、梅花鹿茸及鹿花盘三种