黄精多糖对小鼠抗疲劳作用实验探究.docVIP

黄精多糖对小鼠抗疲劳作用实验探究【中图分类号】R-332 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455(2010)08-0148-02 黄精(polygonatum sibiricum Red) 又名老虎姜、太阳草、鸡头参,是百合科黄精属多年生草本植物的干燥根茎,始载于《名医别录》,李时珍引《神仙草芝经》云:“黄精宽中益气,使五脏调和,肌肉充盈,骨髓坚强,其力倍增,多年不老,颜色显明,发白更黑,齿落更生”。黄精是一种传统名贵中药,具有宽中益气,益肾填精,滋阴润肺,生津补脾,安五脏,填精髓等功效,在抗菌、解毒、抗疲劳、抗衰老等方面均有较好的效果??[1]?。其化学成分主要有:黄精多糖、甾体皂苷、蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、维生素和多种对人体有用的氨基酸等化合物??[2]?,其中黄精多糖(polygonatum sibiricum poly Saccharides)是黄精化学组成的一个重要组成部分,也是黄精主要生物学活性成分之一。? 1 材料与方法 1.1 实验动物:昆明种雄性小鼠,6～8周龄,体重18～22g,购自中南大学湘雅医学院(许可证号:SCXK湘2007-2008),饲养于室内通风柜,每天正常供食及饮水。 将小鼠随机分为4组,每组20只,组间体重经t检验无显著差异。对照组、低剂量、中剂量组和高剂量组,饲养受试物量分别为:0.0、400mg/kg、800mg/kg和1200mg/kg的黄精多糖,对照组给同体积的蒸馏水。每10g体重给予受试物0.2mL,采取灌胃法,连续给予受试物28d后,测定各指标。 1.2 药品与仪器试剂 1.2.1 受试物黄精多糖的提取分离与精制??[4]?:取干燥的黄精根茎,打碎过15目筛网,称取粉末100g,用石油醚于80～90℃下回流脱去黄精粉末中的脂肪,直至石油醚溶剂滴在滤纸上不出现油痕为止。蒸干溶剂后,药渣用80%的乙醇浸渍过夜,于80～90℃回流提取两次,过滤,将药渣用500mL蒸馏水90℃浸提1h,再用等量蒸馏水重复浸提30min,过滤后合并滤液, 减压浓缩至150mL。用氯仿-正丁醇萃取多次,除去浓缩液中的蛋白质,并用1%的活性炭脱色2次,抽滤后的滤液加入95%乙醇使含醇量达80%,静置过夜后过滤,所得滤饼依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤4次,真空干燥,得精制的黄精多糖。 1.2.2 试剂:谷氨酸和γ-氨基丁酸(Sigma公司);丹酰氯(Fluka公司);尿素氮测定试剂盒(北京化工厂)。其他试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。 1.2.3 仪器:LC-2010岛津高效液相色谱仪(日本);YC-30超速离心机(北京安必升科技发展有限公司);752W分光光度计(上海精科实业有限公司),FA-1004分析天平(上海精科实业有限公司);游泳箱(120cm X 70cm X 80cm,自制)。 1.3 小鼠体力性疲劳模型的建立与试验方法 1.3.1 游泳试验??[5]?:连续给药28d,末次给予受试物30min后,在大鼠尾根部负以小鼠体重5%的铅丝,放入水温(25±0.5)℃,水深40cm的游泳箱中,用秒表记录自游泳开始至力竭(小鼠沉没后10S仍不能浮出水面)的时间作为小鼠力竭性游泳时间。 1.3.2 爬杆试验??[5]?:连续给药28d,末次给予受试物30min后,将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒上,使其肌肉处于紧张状态,记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃上跌落下来的时间。第三次跌落时终止实验,累计三次的时间作为爬杆时间。 1.4 血尿素的测定:连续给药28d,末次给予受试物30min后,将小鼠放于水温25± 1℃的游泳箱中游泳90min,休息60min后摘眼球取血,取血清用试剂盒(二乙酰一肟法)测定??[6]?。 1.5 血乳酸的测定:连续给药28d,末次给予受试物30min后,将小鼠放于水温30±1℃的水中负重5%游泳10min停止,分别从游泳前、游泳之后0、15、60min的小鼠眼内眦静脉丛取血。于5ml离心管中加入1% NaF溶液0.48ml,准确吸取全血20μL加入试管底部。用试管上清液冲洗微量吸管数次,再加入蛋白沉淀剂1.5ml,振荡混匀,3000rmin??-1?离心10min,取上清液测定。 1.6 肝糖原的测定:连续给药28d,末次给予受试物30min后,将小鼠放于水温30±1℃的水中游泳60min后停止,立即处死小鼠取出肝脏,精确称取200mg,加入TCA4ml,每管匀浆1min,3000rmin??-1?离心15min,取上清液转移至另一试管内。在沉淀中加入TCA4ml。匀浆1min,再次离心15min,取上清液,与第一次离心的上清液合并,充分混匀。取1ml上清液,每管加入95%的