双抗夹心elisa检测转bar基因抗除草剂大豆 - 食品科学.pdf

222 2016, Vol.37, No.04 食品科学 ※安全检测 Bar 双抗夹心ELISA检测转 基因抗除草剂大豆 1 1 1 2 3 1 1,* 1,* 李小宇 ，张春雨，郭东全，张淋淋，尤 晴，董英山，王永志 ，李启云 （1.吉林省农业科学院植物保护研究所，东北作物有害生物综合治理重点实验室，吉林省农业微生物重点实验室， 吉林 公主岭 136100 ；2.东北农业大学植物保护学院，黑龙江 哈尔滨 150030 ； 3.吉林农业大学农学院，吉林 长春 130118 ） 摘  要： Bar Bar 为快捷有效地检测转 基因抗除草剂大豆，利用已制备的抗除草剂 基因编码蛋白，膦丝菌素乙酰 转移酶（phosphinothricin acetyltransferase ，PAT ）单克隆抗体和多克隆抗体，建立PAT 蛋白双抗夹心酶联免疫 Bar 吸附检测方法，对转 基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示，最佳检测条件为捕获抗体质 量浓度0.125 μg/mL ，包被酶标板，37 ℃孵育1 h后4 ℃静置过夜，检测样品37 ℃孵育1.5 h，检测抗体质量浓度 6.25 μg/mL ，37 ℃孵育1.5 h；PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/mL ，大豆蛋白体系中为8 ng/mL；重复性变异系数小 % Bar 于3 。利用上述检测条件，对实验建立的转 基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测，成功地在根、茎、花、 叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。 Bar 关键词： ；双抗夹心酶联免疫吸附；大豆；检测 Double-Antibody Sandwich ELISA for the Detection of Transgenic Bar Gene Herbicide-Tolerant Soybeans 1 1 1 2 3 1 1,* 1,* LI Xiaoyu , ZHANG Chunyu , GUO Dongquan , ZHANG Linlin , YOU Qing , DONG Yingshan , WANG Yongzhi , LI Qiyun (1. Jilin Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northeast, Institute of Plant Protection, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Gongzhuling 136100, China; 2. College of Plant Protection, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 3. College of Agronomy, Jilin Agricultural