sumo蛋白在体外培养的人晶状体上皮细胞内的 - 中国医科大学学报.pdf

中国医科大学学报 第44卷 第3期 2015年3月 JournalofChinaMedicalUniversity Vol.44 No.3 Mar.2015 ·193 · ·论著 · SUMO蛋白在体外培养的人晶状体上皮细胞内的表达及对 氧化应激的调控作用 1，2 1，2 1，2 1，2 1，2 韩笑 ，王欣玲 ，吴迪 ，张劲松 ，阎启昌 （1. 中国医科大学附属第四医院眼科，沈阳 110005；2. 辽宁省晶状体学实验室，沈阳 110005） 摘要 目的 观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的 氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法 通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在 正常培养的SRA01/04内的表达及分布；通过RT⁃PCR法，观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO1~4mRNA的表达变化。按浓 度实验分组：葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50mmol/L作用24h。按时间实验分组：葡萄糖浓度50mmol/L作用0、6、12、24h。 将GFP⁃SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖（50mmol/L）处理后，转染与非转染组的细 胞存活率和细胞凋亡率。结果 免疫细胞化学染色结果，SUMO 1~4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核，SUMO2/3同 时少量分布于胞质；RT⁃PCR结果可见，与低糖组比较，高糖组随着糖浓度增加SUMO1~SUMO4mRNA表达增加（P0.05）；与 50mmol/L高糖处理0h比较，随着处理时间增加SUMO1~SUMO4mRNA表达增加（P0.05）。与非转染组比较，转染GFP⁃ SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加，凋亡率降低（P0.05）。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达，一定程度 高糖诱导的氧化应激影响SUMOmRNA表达。 关键词 小泛素相关修饰物；人晶状体上皮细胞；白内障；高糖；氧化应激 中图分类号 R776.1 文献标志码 A 文章编号 0258-4646（2015）03-0193-06 网络出版地址 SUMO Expression and Regulation in Oxidative Stress in Cultured Human Lens Epithelial Cells 1，2 1，2 1，2 1，2 1，2 HANXiao ，WANGXin⁃ling ，WUDi ，ZHANGJin⁃song ，YANQi⁃chang （1.DepartmentofOphthalmology，TheForthAffiliatedHospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyang110005，China；2.LaboratoryofLensResearchofLiaoningProv⁃ ince，Shenyang110005，China） Abstract Objective Toobservetheexpressionofsmallubiquitin⁃relatedmodifiers （SUMO）proteininnormalculturedhumanlensepithelial cells（SRA01/04）anddiscussregulationeffectsofSUMOproteinonoxidativestressinducedbyhighglucose.Methods Theexpressionandlocal⁃ izationofSUMO1，2/3，4wasdetectedinnormalculturedSRA01/04cellsthroughimmunocytochemistry.ThemRNAexpressionlevelsofSUMO1 ⁃4wereexaminedbyRT⁃PCRaftertheSRA01/04cellstreatedwithhighglucosemediaatdi