东方百合tom×亚洲百合quito的ARP—PCR鉴定.pdfVIP

试验研究2008．3 巷iI： jl 东方百合tom X亚洲百合quito的 ARP—PCR鉴定 柴卫淑 谭学林 (1．山东丝绸纺织职业学院 淄博25 53OO；2．云南农业大学农学与生物技术学院 昆明65O2O1) 摘要：以不同杂种系的百合品种进行远缘杂交培育杂种。杂种采用Anchored random primer—polV— merase chain reaction(ARP—PCR)鉴定．即利用已经在百合染色体上锚定的引物，扩增亲本和杂种 的DNA．鉴定杂种。首次报道了利用ARP—PCR技术鉴定百合杂种。实验结果表明：ARp—PcR技 术中锚定引物的长度是15bp，退火温度54~(2，只扩增出材料的主带型，可重复性高，可靠性好。 关键词：百合：远缘杂交：ARP—PCR 1 前言 也不完全相同。杂种鉴定时，应尽可能在百合生长的 百合是单子叶植物纲百合科(Liliaceae)百合属 同一阶段、同一部位采样。如果父母本生长在田间， (Lilium)植物的总称。百合花型优美，高贵典雅，观赏 杂种幼苗生长在培养基上．同工酶可能有差异．此时 价值很高，是世界重要的鲜切花品种之一。随着百合 采用同工酶做杂种鉴定．结果不可靠。由于在植物生 类植物在国际花卉贸易份额的不断提高．促进了新 长的不同环境，不同发育阶段，所携带的DNA是稳 品种的选育和推广。种内杂交育种与种问杂交育种 定的，所以分子标记技术成为杂种鉴定、分析性状连 是百合育种最重要的途径．可以人为将有利的遗传 锁的常用技术手段。Abe在研究亚洲百合杂种系花 性状进行自由组合，在田问得到表现后，就可以获得 色素苷形成的基因分析中，利用17个 l0bp，37个 新品种。但是百合杂交常有明显的不亲和性，常使杂 15bp，14个20bp的随机引物，33个ISSR引物，绘制 种胚早期败育．致使在田问很难得到杂种种子加以 出遗传图谱。这些引物在百合染色体上得到锚定．有 繁殖。鉴于育种中杂种胚和胚乳的不亲和导致的杂 确切位点，可以作为百合RAPD分析的基础。 种胚败育，可采用胚挽救技术来解决。但在培养过程 本试验通过ARP—PCR鉴定百合远缘杂种苗的 中．外植体携带的母体组织也可能诱导成苗．所以必 真实性，即采用Abe(2002)已经锚定的百合随机引 须进行杂种鉴定。 物对杂种及亲本的DNA进行扩增，判断杂种真实 百合育种中常见的杂种鉴定方法有形态鉴定、 性。该方法在国内尚属首次报道，为今后充分利用国 染色体鉴定、同工酶酶谱分析鉴定和分子标记技术 内百合资源，培育远缘杂交种，育出我们自己的百合 形态鉴定是百合育种中最简单、最经济的杂种鉴定 新品种提供技术资料。 方法，新品种重要的是具有新的花型、花形、花色。杂 2 材料与方法 种幼苗种植到田问，开花时，杂种与父母本的花型、 2．1 供试材料 花形、花色相比较即可。如果花型、花形、花色与父母 通过子房切片培养的方法挽救杂种胚．获得杂 本不同，就可以确定是杂种。但是这种鉴定方法需要 种苗。东方百合tomx亚洲百合quito，切片培养8d、 的时间长，必须等到百合开花。染色体作为稳定的遗 1ld萌发的杂种苗。 传物质，用于杂种鉴定时不受外界环境的影响．而且 2．2 方法 操作过程比较简单，在幼苗长根时采样分析．可以在 2．2．1 百合DNA提取 参照酚提取法，提取百合 幼苗期确定杂种真实性。但是．如果父母本在田问种 DNA。剪1～4g百合的新鲜叶片，在液氮中磨碎．提取 植，采样繁琐，而且百合的染色体较大．在压片过程 DNA混合物后加人RNase，再加人NaAc和乙醇 振 中容易重叠，导致分辨不清。同工酶酶谱分析鉴定在 荡 昆匀，析出DNA。加适量TE溶解，保存。对所提取 幼苗长出幼叶时进行同工酶的提取，可以在幼苗期 的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，检测DNA浓度和质 鉴定杂种，而且操作过程简单 但是同工酶是基因表 量。 达后的产物，在植株的不同生长阶段，同工酶的表达 2．2．2 PCR扩增及电泳检测 参照顾红雅．PCR反