单克隆抗体n-糖基化的毛细管电泳和质谱分析 - agilent.pdf

单克隆抗体 糖基化的毛细管电泳和质 N- 谱分析 应用简报 生物制药 作者 Suresh Babu C.V and Ravindra Gudihal Agilent Technologies India Pvt. Ltd Bangalore, India 摘要 糖基化是最重要的一种翻译后修饰，指的是将糖基部分连接到蛋白质上。糖基化模式的 改变对免疫原性和整体生物活性有很大影响。因此，糖基化表征对基于生物医药的应用 至关重要。虽然现在已有多种分析技术被应用于分析 糖基化，但低水平糖基化的精确 N- 测定仍面临着极大的挑战。 本应用简报展示了利用毛细管电泳和质谱(CEMS) 对重组单克隆抗体(mAb) 糖基化进行分 析。此方法包括利用 糖苷酶 酶解 得到多糖，对多糖进行荧光标记 N- F (PNGase F) mAb （氨基吡 三磺酸三钠盐， ），并利用 串联 精 8- -1,3,6- ATPS Agilent 7100 CE Agilent 6520 确质量 进行分析。从使用的重组 中，我们共鉴定出 种多糖，从 Q-TOF LC/MS mAb 7 每种多糖成分的相对百分比可知，主要及次要糖基化修饰均有存在。本应用简报证明了 高分离速度的 与高灵敏度检测限的 相结合，使 成为一种替代 方 CE MS CE-MS LC/MS 法对 mAb 或其它糖蛋白进行糖基化表征的有效且最有前景的方法。 前言 本应用简报展示了利用 CE-QTOF MS 对重 在干燥的多糖样品中，加入2.5 µL 50 mM 组 所得的 糖基进行分析。APTS 标 的 柠檬酸溶液，2.5 L 1 M mAb N- APTS 1.2 M µ 近年来，单克隆抗体 (mA b) 已成为生物 记的 CE-MS 方法有助于鉴定 mAb 上的所 氰基硼氢化钠的T HF 溶液，水浴 37 °C 制药行业具有潜力的新兴蛋白候选药物。 有糖基。此外，还可得到每种多糖的相对 下过夜。加入 50 µL 水稀释反应混合物以 其药物研发流程包括一系列精细的控制和 百分比，以表征主要及次要糖基化修饰。 停止反应。利用含有 Phy Nex us 正相聚 评估步骤，