恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立 - 现代食品科技.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.9 恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌 方法的建立 1 1 2 2 2 1 李丽丽 ，叶蕾 ，张璜 ，曹炜伟 ，邓梓欣 ，石磊 （1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）（2.广州迪澳生物科技有限公司，广东广州 510663） 摘要：为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌，本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌 16S rRNA 设计三 组 LAMP 引物，采用Deaou-308C 恒温实时荧光检测平台，选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测；选取阪崎肠杆菌标准菌株进 行基因组 DNA 灵敏度和最低检测限测定，同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限，利用 RealAmp 法和国标法对20 份市售奶粉进行对比实验。结果显示，引物组 16S-11 扩增效率最优，与常见病原菌无交叉反应，对阪崎肠 2 2 3 杆菌基因组 DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到 10 CFU/mL 、10 CFU/mL 和 10 CFU/mL；对阪崎肠杆菌基 3 3 4 因组DNA 和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到 10 CFU/mL 、10 CFU/mL 和 10 CFU/mL；在20 份市售奶粉 样品中 RealAmp 检测结果与传统国标培养结果一致，表明本文建立的阪崎肠杆菌 RealAmp 检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。 关键词：恒温实时荧光法；阪崎肠杆菌；奶粉 文章篇号：1673-9078(2016)9-308-313 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.9.044 A Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Method to Detect Enterobacter sakazakii in Milk Powder 1 1 2 2 2 1 LI Li-li , YE Lei , ZHANG Huang , CAO Wei-wei , DENG Zi-xin , SHI Lei (1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) (2.GuangZhou Deaou Biotechnology Co., Ltd., Guangzhou 510663, China) Abstract: In order to rapidly detect Enterobacter sakazakii in milk powder, a real-time fluorescence