AAV-hTGFβⅠ体外传染鼠椎间盘细胞再移植的实验分析.pdfVIP

AAV—hTGFBI体外转染鼠椎问盘细胞再移植的实验研究 青岛大学医学院附属医院脊柱外科 研究生李涛 导师刘勇 副主任医师 摘 要 目的： 1(hTGFB1)基因体外 将腺相关病毒(AAV)介导人转化生长因子B 转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎间盘中，观察其对椎问高度、 II型胶原和蛋白多糖的影响。 方法： Wistar大鼠40只，以L6／Sl椎间盘作为空白对照组，不进行处理； L5／L6椎间盘作为针刺组，暴露以后用显微注射器从椎间盘的前外侧向 椎间盘内注射磷酸盐缓冲液；L4／L5椎间盘作为实验组，手术nO暴露 B。体外转 后用显微注射器从椎间盘的前外侧向椎间盘内注射AAV咄TGF 染后的椎间盘细胞悬液。术前对所有大鼠腰椎间盘进行X线检查，分别 于术后4周，8N各取20只大鼠进行腰椎间盘X线检查，并随即处死利用 反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)对腰椎间盘组织中的II型胶原和蛋白 多糖的基因表达进行半定量分析。 结果： 术后4周，针刺组手术前后椎间盘高度指数的变化(％DHI)均低于实 IIIII I I II I rll I II III III l 9 0．05)；实验组手术前后％DHI略低于空白对照组，差异无显著性 实验组II型胶原和蛋白多糖表达略低于空白对照组，差异无统计学意义 实验组II型胶原和蛋白多糖表达略低于空白对照组，差异无统计学意义 (PO．05)。 结论 1．腺相关病毒体外转染转染大鼠的椎间盘细胞具有较高的的转染 效率并能实现较强的基因表达。 2．再次证实了在以大鼠为实验动物的情况下，椎间盘细胞移植是可 行的。 3．AAV-hTGF131基因体外转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎 间盘中，空白对照组和实验组多聚蛋白多糖和II型胶原的表达量 在术后4周，8周都明显高于针刺组，表明其可以提高椎间盘多聚 蛋白多糖和II型胶原的表达。 4．AAV-hTGF Bl基因体外转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎 间盘中，空白对照组和实验组的术前与术后4周％DHI，以及术前 与术后8周％DHI都明显要高于针刺组，表明其有助于椎间盘高度 的维持。 关键词转化生长因子B：腺相关病毒；胶原Ⅱ型：蛋白多糖：椎间盘 Abstract ective Obj Toobservetheeffectof 1 transfected AAV-hTGFl3cells transplantat -ionon of intervertebral lIand of height disc，collagentype proteoglycan Methods One hundredofintervertebraldiscsfrom ratswere forty evenly dividedintothree controlof L6／S1 normaldiscs groups：bl