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实验25 荔枝皮中多酚类物质的提取分离及其抗氧化性研究 （本实验需60+ 学时） 【关键词】 荔枝皮，多酚，抗氧化性能 【实验目的】 1. 了解多酚类物质的基本性质及其抗氧化性能 2. 熟悉天然产物的提取、分离及分析技术 【实验原理】 荔枝含有丰富的荔枝多糖、黄酮、氨基酸和人体必需的微量元素，具有滋补 作用和药用价值，是水果中的珍品，有“果中之王”之美誉。其根能消肿止痛，用 于胃脘胀痛。果肉则益气补血，用于病后体弱、脾虚久泻、血崩。而荔枝核能够 理气、散结、止痛，用于疝气痛，鞘膜积液，睾丸肿痛，胃痛，痛经。荔枝皮一 直被大众所忽略，但研究表明其中富含具有良好抗氧化和抗自由基的多酚类物质。 多酚是在植物性食物中发现的、具有潜在促进健康作用的化合物。它存在于一些 常见的植物性食物，如可可豆，茶，大豆，红酒，蔬菜和水果中。多酚类物质被 称为“第七类营养素” ，属植物次生代谢产物，具有多元酚结构（图1），它一般 由三个环构成：A 环、B 环（连接有羟基） 和C 环（含氧碳环），按结构可分 为酚酸类（phenolic acids ）、类黄酮类（flavonoids ）及1, 2 - 二苯乙烯（stilbenes ） 和木酚素类（lignans ） 。 图1 类黄酮类多酚的骨架结构 它主要存在于植物的皮、根、叶和果实中，在植物中含量仅次于纤维素、半 纤维素和木质素，目前已经分离鉴定了8000 多种多酚类物质。多酚不仅具有较 强的抗氧化能力，能有效清除体内过剩的自由基，抑制脂质过氧化，对自由基诱 1    发的生物大分子损伤起到保护作用；多酚也可以阻止和抑制癌症发病，对癌变的 不同阶段能进行多方面的抑制；同时也是有效的抗诱变剂，能减少诱变剂的致癌 作用，提高染色体精确修复能力，进而提高体细胞的免疫力，抑制肿瘤细胞的生 长。此外，多酚类物质还可以通过抑制酪氨酸酶和过氧化氢酶的活性，清除皮肤 细胞中的活性氧来达到美容的目的。 多酚类化合物的提取分离方法多种多样。经典的提取方法主要是有机溶剂提 取法，这种提取方法不需要特殊的仪器，应用较为普遍，但存在着产品安全性低、 耗时长、提取率低等缺点。随着科学的进步，一些以先进仪器为基础的新型提取 方法，如超声波辅助提取、微波辅助提取、生物酶解提取、超临界流体萃取和膜 萃取技术等，以其高效、节能、环保等优点，得到越来越广泛的应用。微波辅助 萃取是利用微波加热均匀、高效、选择性好的特点对目标物进行萃取分离。与传 统方法相比，该技术快速、高效、操作简便、节省溶剂，其应用范围从环境分析 一直扩展到食品、化工和中药提取等领域。 本实验针对作为废弃物的荔枝果皮，分别采用微波辅助提取法和传统的溶剂 回流提取法提取荔枝皮中的多酚类物质，通过红外（IR ）、紫外（UV ）、液相 色谱（HPLC ）、薄层色谱（TLC ）等方法研究多酚类物质的组成和含量，同时 开展荔枝果皮中多酚类物质的抗氧化性能研究。 【仪器试剂】 仪器：旋转蒸发仪，紫外可见分光光度计，微波辅助萃取仪（MASII ，上海新仪）， 高效液相色谱仪（Shimadzu 20AT），色谱柱ODS-C18（250 mm ×4.6 mm, 5 μm i.d. ）， 电子分析天平（0.1 mg ），一般实验室常用仪器。红外光谱（Nicolin ），制备色 谱-质谱（Shimadzu 2010AT），核磁共振仪（Varian, Mercury-Plus 300 ）。 试剂：干荔枝皮，分析纯95% 乙醇、碘、碳酸钠、乙酸、浓硫酸、福林酚试剂、 表儿茶素、儿茶素、没食子酸、槲皮素标准品、α, α-二苯- β-苦味肼（DPPH ）， 色谱纯甲醇、乙腈，水为二次蒸馏水。 【实验步骤】 1．荔枝皮中多酚化合物的提取 （1）索氏提取法：将荔枝皮洗净后在60℃烘干，准确称取5.0 g 样品，用滤纸包 2    好，装入索氏提取器中，加入200 mL 95% 乙醇溶液，回流提取4 h ，过滤并用95% 乙醇定容至250 mL容量瓶备用。（需优化条件：回流时间、液固比、提取溶剂） （2 ）微波辅助提取法：准确称取在60℃烘干的荔枝皮样品2.