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ni-nta 亲和层析介质 - 金斯瑞
Ni‐NTA 亲和层析介质
1、产品描述
金斯瑞Ni‐NTA 亲和层析介质(产品编号L00250)是把NTA (氮川三乙酸)共价偶联到4%交联的琼脂糖介质
上,再通过NTA 的4 个结合位点螯合Ni2+制备而成的亲和层析介质。Ni‐NTA 亲和层析介质的Ni2+脱落率非常低,
它能耐受蛋白纯化过程中使用的很多添加剂,并且有着较高的蛋白结合能力和稳定性,因此 Ni‐NTA 亲和层析介
质非常适用于多组氨酸重组蛋白的纯化。我们提供10 ml,25ml,500 ml 三种规格的包装。
表1:产品特征
柱体积 10 ml、25 ml 和500 ml (20 ml、50 ml 和1000 ml 的50 %悬浆液)
吸附量 每毫升填料吸附量20 mg 6xHis‐tagged 蛋白(27 kDa)
基质 4%交联琼脂糖
平均粒径 90 μm (45‐165 μm)
保护液 1×PBS (含 20%乙醇)
存储条件 2‐8℃
保质期 2‐8℃储存18 个月
表2:Ni‐NTA 亲和层析介质可耐受试剂
变性剂 表面活性剂 还原剂 盐 其他
6 M 盐酸胍 2%Triton X‐100 20 mM β‐ME 4 M MgCl 50%甘油
2
8 M 尿素 2% Tween 20 1 mM DTT 5 mM CaCl2 20%乙醇
1% CHAPS 2 M NaCl 1 mM EDTA
2、纯化步骤
2.1 常规条件下纯化多组氨酸标签蛋白
2.1.1 试剂准备
所用缓冲液需采用高纯水配制,使用前建议用0.45 μm 滤膜过滤。
Lysis 平衡缓冲液(LE Buffer):50 mM Na HPO , 0.3 M NaCl, pH=8.0
2 4
洗涤缓冲液:50 mM Na HPO , 0.3 M NaCl, 10 mM imidazole pH =8.0
2 4
洗脱缓冲液:50 mM Na HPO , 0.3 M NaCl, 250 mM imidazole pH =8.0
2 4
2.1.2 样品准备
大肠杆菌中表达的重组蛋白
1)4 ℃离心(如:5000 rpm 离心5 分钟)收集50 ml 培养基中的细胞。
2 )加入8 ml LE Buffer 重新悬浮细胞,如有需要可加入适量的PMSF 或者其他蛋白抑制剂。
注意:加入的蛋白抑制剂应确定它不会和Ni‐NTA 亲和层析介质反应。
3 )超声破碎细胞,在冰上进行操作,破碎 1 秒,冷却 3 秒,总时间为 30‐45 分钟;
可选:如果样品太粘稠,可加入RNase A
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