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包涵體蛋白復性條件研究服務包涵體蛋白復性條件研究服務 包涵體蛋白復性條件研究服務包涵體蛋白復性條件研究服務 簡介簡介 簡介簡介 包涵體是外源基因在原核細胞中表達時，尤其在大腸桿菌中高效表達時，形成的由膜包裹 的高密度、不溶性蛋白質顆粒，在顯微鏡下觀察時為高折射區，與細胞質中其他成分有明 顯區別。包涵體形成是比較複雜的，與胞質內蛋白質生成速率有關，新生成的多肽濃度較 高，無充足的時間進行折疊，從而形成非結晶、無定形的蛋白質的聚集體；此外，包涵體 的形成還被認為與宿主菌的培養條件，如培養基成分、溫度、 pH 值、離子強度等因素有 關。細胞中的生物活性蛋白質常以可融性或分子複合物的形式存在，功能性的蛋白質總是 折疊成特定的三維結構。包涵體內的蛋白是非折疊狀態的聚集體，不具有生物學活性，因 此要獲得具有生物學活性的蛋白質必須將包涵體溶解，釋放出其中的蛋白質，並進行蛋白 質的復性。包涵體難溶於水中，在變性劑溶液（如鹽酸胍、尿素）中才能溶解。在這些溶 液中，溶解的蛋白質呈變性狀態，即所有的氫鍵、疏水鍵全被破壞，疏水側鏈完全暴露， 但一級結構和共價鍵不被破壞。因此當除去變性劑時，一部分蛋白質可以自動摺疊成具有 活性的正確構型，這一摺疊過程稱為蛋白質的復性。 應用應用 應用應用 包涵體的主要成分就是表達產物，其可佔據集體蛋白的 40%~95%, 此外，還含有宿主菌的 外膜蛋白 、RNA 聚合酶 、RNA 、DNA 、脂類及糖類物質，所以分離包涵體後，還要採用 適當的方法（如色譜法）進行重組蛋白質的純化。 我們的包涵體蛋白複性條件研究服務我們的包涵體蛋白複性條件研究服務 我們的我們的包涵體蛋白複性條件研究服務包涵體蛋白複性條件研究服務 利用原核系統進行蛋白質表達是獲得重組蛋白最經濟、有效的方式之一。但外源蛋白質在 原核細胞中容易形成包涵體，這一特點為獲得有活性的蛋白帶來了很大的困難。相對於目 標蛋白的可溶性表達而言，包涵體表達也具有若干額外的優勢，如有利於純化、目標蛋白 質不易被降解等。因此得到包涵體表達的目標蛋白後第一需要考慮的是如何通過複性獲得 正確折疊的蛋白。 要將包涵體蛋白成功複性需要考慮很多因素，為了摸索出一種合適的複性方案，往往需要 付出大量煩瑣艱苦的工作。拜爾碁特生物公司的蛋白質專家群在蛋白質複性領域中積累了 十幾年的經驗，建立了一套系統的蛋白質複性包涵體蛋白複性研究體系。此套體系允許/ 比較同步進行的20種不同的複性條件，從而定量分析影響蛋白質複性包涵體蛋白複性過/ 程的諸多因素，推導出特定蛋白包涵體複性的最佳方案。 通過拜爾碁特包涵體複性研究體系，可以同時比較諸如蛋白質起始濃度、氧化還原電對、 離子強度、不同鹽離子、蛋白質聚集抑制劑、pH 、表面活性劑、變性劑去除速度等因素 與複性效率的相關性。 利用該包涵體複性研究體系，拜爾碁特已經成功的複性了近 100種大腸桿菌表達的包涵體 蛋白，涉及細胞因數、可溶性受體、胞質蛋白、核蛋白等。 當然，並非所有的包涵體蛋白都能夠成功地進行複性，拜爾碁特生物公司還提供包括酵 母、昆蟲細胞、哺乳動物細胞等真核表達體系，最大限度的滿足您的科研要求。 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 —— 步驟步驟 1. 包涵體製備：包涵體製備 ： 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 步驟步驟 包涵體製備包涵體製備 ：： 可以由拜爾碁特公司製備或者由客戶提供。 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 —— 步驟步驟2. 包涵體溶解：包涵體溶解 ： 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 步驟步驟 包涵體溶解包涵體溶解 ：： 根據蛋白質不同的性質，我們可以選擇尿素、鹽酸胍、去垢劑、極端 pH 等，以保障最大 程度的獲得單體狀態的變性蛋白。 時間： 1周 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 —— 步驟步驟3. 小規模複性實驗：小規模複性實驗： 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 步驟步驟 小規模複性實驗小規模複性實驗：： 拜爾碁特公司將為您提供20種不同組合條件複性的目標蛋白，供您進行功能檢測。 時間： 1周 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 —— 步驟步驟4. 小規模製備：小規模製備： 包涵體蛋白複性包涵體蛋白複性 步驟步驟 小規模製備小規模製備：： 根據客戶回饋的資料，拜爾碁特公司將提供合理的分析、判斷，進一步擬定合適的複性條 件，並