细胞游离DNA定量分析用于浆膜腔积液鉴别诊断研究.pdfVIP

638· 检验医学2008年 11月第23卷第6期 LaboratoryMedicine，November2008，Vol23．No6 文章编号：1673—8640(2008)064)638434 中图分类号：Q503 文献标识码：A 细胞游离 DNA定量分析用于浆膜腔积液鉴别诊断研究 潘永军， 周国平 (常州市第三人民医院检验科，江苏常州 213001) 摘要：目的 应用实时荧光定量PCR检测浆膜腔积液中细胞游离DNA含量，探讨浆膜腔漏出液和渗出液 鉴别诊断指标。方法 选择 B一珠蛋白基因作为细胞游离 DNA的代表标志物 ，设计引物和探针建立双标记荧光 素 TaqMan系统；以人类全基因组 DNA为模板PCR扩增 ，扩增产物经克隆建立标准物 ，从而对浆膜腔积液中细 胞游离DNA进行定量分析。结果 对 172份明确诊断的浆膜腔积液标本进行分析，浆膜腔积液中细胞游离 DNA浓度的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积为0．958，95％可信区间(cI)为0．931～0．986(P=0．00)； 积液中细胞游离DNA的cutoff浓度为306拷贝／mL，对浆膜腔积液漏出液和渗出液的鉴别诊断灵敏度为91． 8％，特异性为92．3％；渗出液(细菌性、结核性和恶性)中细胞游离DNA浓度明显高于漏出液(P≤0．001)，细菌 性积液和结核性积液之间细胞游离DNA浓度差异无统计学意义(P=0．996)，但明显高于恶性积液中细胞游离 DNA浓度(P≤0．O18)。结论 浆膜腔积液中细胞游离DNA可作为浆膜腔漏出液和渗出液鉴别诊断指标。 关键词：细胞游离DNA；实时荧光定量PCR；浆膜腔积液 Quantitativeanalysisofcell·freeDNA inserousfluidforclassificationofserouseffusions pANYongiun． ZHOUGuoping． (DepartmentofClinicalLaboratory，ChangzhouⅣO．3Hospital，Jiangsu，213001，China) Abstract：0bjective Cell—freeDNA concentrationinserouseffusionsweremeasuredbyrea1．timefluorescent quantitativepolymerasechainreaction(PCR)，f0ratargettoclassifyingthetransudativeandexudativefluidinserous effusions．Methods 8一globinDNA waschosedastherepresentativemarkerforcell—freeDNA inscrouseffusions．On thebasisof3-globinDNA sequence，primersandprobeweredesignedandthesystem ofTaqManwithmarkedbi—fluo— rescencewasestablished；PCR enlargedwiththeformworkofmankindfullgeneseriesDNA ，andtheenlargingproducts wereclonedandthesamemattersasthestandardizedmatterwereproduced．Therebyusingthisstandardizedmatters ， cell—freeDNA inserouseffusionscanbequantitativelyanalysed．Results Cell—freeDNA in172samplesofthedefinite transudativeandexudativefluidwasexaminted．TheareaundertheROCcurvewas0．958l95％ confidenceinterval (CI)，0．93l～0．986(P=0．000)]．TheROCcurvewasplottedtodeterminethecutoffDNAconcentration