电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠听觉中枢蛋白质组影响初步的研究.pdfVIP

目 录 1 电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠听觉中枢蛋白质组影响的初步研究…..1 1.1 中文摘要…………………………………………………………..1 1.2 英文摘要…………………………………………………………..5 1.3 前言………………………………………………………………..9 1.4 材料与方法………………………………………………………13 1.5 结果……………………………………………………………….25 1.6 讨论……………………………………………………………….40 1.7 结论……………………………………………………………….52 1.8 参考文献………………………………………………………….53 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………….67 2 致谢……………………………………………………………….68 3 蛋白质组学在听觉系统中的研究应用进展（综述）……………70 2 电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠听觉中枢蛋白质组 影响的初步研究 摘 要 目的: 建立D-半乳糖年龄相关性聋豚鼠模型，探讨电针耳穴对 D-半 乳糖所致的年龄相关性聋豚鼠听觉中枢蛋白质组的影响。方法: 1. 分 组及模型建立：成年豚鼠30 只，按随机数字表法分成三组：D-半乳 糖模型组 10 只，D-半乳糖+ 电针组10 只，对照组10 只，18 月龄豚 鼠 10 只作为自然老化组。D- 半乳糖模型组予以 D- 半乳糖 （300mg/kg·day ）颈背部皮下注射，每天1 次，共六周；对照组予以 等量生理盐水颈背部皮下注射，每天1 次，连续6 周；D-半乳糖+ 电 针组予以D-半乳糖（300mg/kg·day ）颈背部皮下注射，每日1 次，半 小时后予以电针听宫穴、翳风穴治疗15 分钟，每日1 次，连续6 周。 18 月龄组豚鼠常规饲养。2. 听力学检测：实验结束后各组进行听性 脑干反应（Auditory brainstem response, ABR ）和多频稳态诱发电位 （Auditory steady state response, ASSR ）检测。3. 听皮层蛋白质组图 谱建立及差异蛋白的鉴定：用常规细胞裂解法裂解细胞提取蛋白， Bradford 法测定蛋白质浓度。对照组、D-半乳糖模型组和D-半乳糖+ 电针组三组豚鼠听皮层进行双向电泳（Two-dimensional electrophoresis, 2-DE ）。第一向采用pH 4-7 的固相pH 梯度等电聚焦， 第二向采用浓度为 10%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。考染 并照片获得双向电泳图谱，筛选出 10 个具有差异表达的蛋白斑点。 切取蛋白质斑点，应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术 1 （Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry, MALDI-TOF-MS ）进行检测，获得各蛋白质的肽指纹图谱，结合2-DE 图谱中各蛋白质点的等电点 （Isoelectric point, PI ）和分子量 （Molecular weight, MW ）值，利用Mascot 软件进行匹配检索NCBI 数据库来鉴定蛋白质。4.听皮层及下丘儿茶酚氧位甲基转移酶 （Catechol-0-methyltransferase, COMT ）、β-链蛋白（β-catenin ）表 达的研究：采用蛋白质印迹 （Western blot ）方法测定对照组、D-半 乳糖模型组、D- 半乳糖+ 电针组和 18 月龄组豚鼠听皮层及下丘 COMT、β-catenin 蛋白表达变化情况。5. 统计学方法：采用SPSS13.0 软件进行分析，运用单因素方差分析检验，P0.05 具有统计学意义。 结果：1. 体重变化：对照组、D-半乳糖模型组和