（二）目的基因与载体的连接.ppt

以后通过若干试验，进一步做出判断：限制作用 与噬菌体DNA降解相关联。1965年他完整的提 出一个假说：可能存在一种位点专一的限制性内 切酶。但1968年他分离到的却是位点并不专一 的限制酶。 1968年初正在研究流感嗜血杆菌Rb株遗传重 组的史密斯，在实验中偶然选用了噬菌体P22标记 DNA,又偶然地遇到了无法从细菌细胞中回收外源 DNA这样一个实验结果。当时他得到阿尔伯已经 分离到内切酶的消息，便联想到自己的工作，意识到 手中的噬菌体DNA可能受到了限制作用。于是他立刻 放下这一研究课题，应用自己设计的黏度计，全力以 赴分离和研究预想中的限制酶。1970年终于分离到真 正位点专一的限制性内切酶， 从而使阿尔伯的假说变 为一种科学学说。 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1978 for the discovery of restriction enzymes and their application to problems of molecular genetics Werner Arber 1/3 of the prize Switzerland ? Biozentrum der Universit Basel, Switzerland b. 1929 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1978 for the discovery of restriction enzymes and their application to problems of molecular genetics Daniel Nathans 1/3 of the prize ? Johns Hopkins University School of Medicine Baltimore, MD, USA b.1928 d. 1999 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1978 for the discovery of restriction enzymes and their application to problems of molecular genetics Hamilton O. Smith 1/3 of the prize ? Johns Hopkins University School of Medicine Baltimore, MD, USA b. 1931 1943年人们已知胰岛素是由51个氨基酸构成的, 桑 格用特殊的化学试剂以及电泳、色谱等方法，逐段对其 分解测定，经过十年努力, 终于在1953年精确测定了胰 岛素的一级结构。 它是由分别含有21个30个氨基酸残 基的两条链通过其中两个半胱氨酸的两个—SH, 氧化后 以-S-S-联结起来的。 这是人们第一次精确测定蛋白质 的结构, 为以后测定更复杂的蛋白质结构打下了良好的 基础。桑格为此荣获了1958年的诺贝尔化学奖。 20世纪60年代以后，桑格的研究方向转向了测 定核酸中核苷酸的连接顺序，又获得了1980年诺贝 尔化学奖。至目前为止， 桑格是惟一一位两次获得 诺贝尔化学奖的科学家。 1971年伯格研究小组用限制性内切酶打开了 肿瘤病毒SV40的DNA,然后把噬菌体λ的一段DNA 切割下来，装到被打开的SV40的DNA上，成功获 得了SV40-λ新的杂种,也就是产生了新的生命。由 于政府和科学家耽心引起不良后果，进一步的工作 在1975年才开展。他们把许多基因接到SV40上， 并把杂种SV40引入细胞或细菌中。 这就导致了现代“基因工程”的诞生。人们可以 把一段能产生某种蛋白质的基因植入某种细菌的DNA 中，当细菌繁殖时，这段基因就不断产生这种蛋白质。 例如，γ干扰素、肿瘤坏死因子就是这样产生出来的。 伯格作为“基因工程”的开拓者荣获了1980年诺贝尔 化学奖的一半。 ? 本年度化学奖的另一半为基尔伯特和桑格获得。 作为物理学家的基尔伯特受科学交流的启发，使 用硫酸二甲酯处理DNA， 使DNA中有腺嘌呤和 鸟嘌呤的地方断开，从而获得到一系列不同长度 的脱氧核苷酸片断。分别测定各个片断，最后就 能确定整个DNA中全部脱氧核苷酸的排列顺序。 如果说物理学家基尔伯特是用化学方法测定DNA中 脱氧核苷酸的顺序，那么化学家桑格则是用生物学中酶 的切割作用把RNA切割成小的片段，来测