重组凋亡相关蛋白pdcd5 的纯化及稳定性 - 北京大学学报(医学版).pdfVIP

北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） ·+0) · dOVGK2. O; !1eUKB VKUf1G3U^S（-12.^- 3#U1K#13 ）% f9=( +$% K9( E% 2LQ( ’))+ ·论著 · 重组凋亡相关蛋白!#$ 的纯化及稳定性 ! ’ % ’ 王% 露 ，范% 慧 ，莫晓宁 ，张颖妹 ，魏征人 ，钟英成 ，黄大无 （( 北京大学人类疾病基因研究中心，北京% )))*+ ；’ ( 北京北医联合生物工程公司） ［关键词］!#$ ；重组蛋白质类, 分离和提纯；凋亡；-./0) 细胞 ［摘% 要］目的：建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白!#$ 的纯化路线，获得高纯度的!#$ 蛋白，并观 察其稳定性。方法：以包涵体形式表达的!#$ 融合蛋白，经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、121 3456789:4 ;7: ;=9 和34567?8@= 3/’)) 两步层析分离获得!#$ 蛋白。选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度，33 A !2B1 检定 蛋白质的稳定性。结果：经毛细管电泳方法检测!#$ 蛋白纯度为))C ，相对分子质量$ *)) ，等电点$( D 。生 物学活性分析!#$ 蛋白能够促进撤除细胞因子的-./0) 细胞的凋亡，呈现一定的量效关系。稳定性研究发现 储藏中的!#$ 蛋白不稳定，对温度敏感，E F 和’$ F 极易降解，而A ’) F 和冻干保存则相对稳定。结论：本研 究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度!#$ 蛋白。稳定性实验提示!#$ 宜在 A ’) F 以下或冻干保 存。 ［中图分类号］ G+D’% % ［文献标识码］2% % ［文章编号］0H /0HI（’))+ ）)E/)+0)/)E !#$%$’($)* ’*+ ,(’-$.$(/ ,(+$0, )% 1#)2’#/)($ !3435 1#)(0$* J2KB .L! ，;2K -LM’ % ，NO IM79PMPQ’ ，R-2KB SMPQT4M ，J1U R64PQ84P ，R-OKB SMPQ?64PQ ，-V2KB 7L （( !4WMPQ VPMX48:M@ #4P48 Y98 -LT7P M:47:4 B4P9TM?: ，Z4M[MPQ% )))*+ ，#6MP7 ；’ ( Z4M[PQ N4\M?7= VPMX48:M@ VPM9P UP?985987M9P ） 678 9:;3% !#$ ；G4?9T]MP7P 5894MP:, M:9= ；25959:M: ；-./0) ?4==: =?;8 % :-@0($A0 ：^9 :4 L5 7P 4YY4?MX4 7P\ :MT5=4 5L8MYM?7M9P T469\ 9 9]7MP 6MQ6=@ 5L8MYM4\ 589W78@9M? 5894MP 9Y !#$ 7P\ :L\@ M: :7]M=M@( 0(B)+, ：G4?9T]MP7P !#$ 5894MP 4_584::4\ MP ! #$%‘ 7: 7??LTL=74\ 7: 7P MP?=L:M9P ]9\@( 2Y48 7:6MPQ ，64 MP?=L:M9P ]9\@ 7: \4P7L84\ ，84P7/ L84\ ，\MQ4:4\ M6 689T]MP4 7P\ 64P 5L8MYM4\ ]@ 9 :45: 9Y ?689T79Q8756@( ^64 5L8M@ 9Y 64 589\/ L?: 7: 7P7=@a4\ ]@ ?75M==78@ 4=4?8956984:M: 7P\ 64 :7]M=M@ 7: M\4PMYM4\ ]@ 33 A !2B1( ;0,.(, ： #75M==78@ 4=4?8956984:M: :694\ 67 64 5L8M@ 9Y 5894MP 7: ))C ，7P\ T9=4?L=78 4MQ6 7: $ *)) M6 5U $ ( D ( ;L8648 ]M97?MXM@ 7::7@ MP\M?74\