磷酸化底物肽的硫代磷酸化及荧光标记.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ， （）： !# !#$$%#% ’()’$ *+,(-+.+(’ /0 *+,1-23+(’ 3+4+(’ $!!! % 5 6% 7 8 ’# 85958!!: ; 磷酸化底物肽的硫代磷酸化及荧光标记 车发云 夏其昌! （中国科学院上海生物化学研究所，上海 $!!!85 ） 摘要 以蛋白激酶 ’ 的一磷酸化底物肽 KLL’3KM 为模型肽，研究了硫代磷酸化及荧光标记反应条件。荧光标 记试剂 ｛［（（ 碘代乙酰）氨）乙基］氨基｝萘 磺酸（， ）的适宜浓度为 ，标记反应缓冲液的 9 $9 959 5 9+’NO’43 5I 6 AAP: K 适宜 为 至 。实验了标记肽分别在 端序列分析、电喷雾质谱和 三氟乙酸存在下的稳定性。比较了标 Q- # 49 ! I 5R 记肽和未标记肽的紫外吸收光谱的差异特征。初步显示高效液相色谱蛋白酶解肽谱分析中，荧光检测硫代磷酸化 荧光标记肽的可能性。 关键词 磷酸化底物肽；硫代磷酸化；荧光标记；标记肽性质 蛋白激酶通过识别磷酸化底物序列，选择修饰 化腺苷酸（ ）、 硫代腺苷三磷酸（ ）、细胞 D’.1 9 ’)1 3 ! ! 蛋白质特定位点，达到精细调节蛋白质生物功能的 色素 均购于 公司。荧光试剂 ｛［ （（碘代 ! 3BVA? 9 $9 ［］ 目的。大多数蛋 白激酶，如磷酸化酶激酶 5 、 乙酰）氨）乙基］氨基 ｝萘 磺酸（， ）购于 D’.1 959 5 9+’NO’43 ［］ ［］ 依赖的蛋白激酶 $ 、 依赖的蛋 白激酶 8 、蛋 白 DM.1 （ ， ， ）公司。乙腈为 .P/DG?U 1UPW/F NGV/H/ ,L X3’ ［］ ［］ 激酶 ( = 、钙调蛋白依赖的蛋白激酶 ++ 、核蛋白激 （英国）产品，三氟乙酸（ ）为 产品。胰 *O- )’ ./UDY ［］ ［］ 酶 ++ 8 ，以及 NM9受体相关的蛋白激酶 6 等，都能 蛋白酶（ 处理过）由本实验室 自制。其他试剂 )1(S 如同接受腺苷三