离子交换色谱法测定小球藻提取物中的核苷酸.pdfVIP

( ) 第 32 卷 分析化学 FENXI HUAXU E 　研究报告 第 8 期 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　 2004 年 8 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1077～1079 离子交换色谱法测定小球藻提取物中的核苷酸 李　意 (南京师范大学分析测试中心 ,南京 210097) 摘 　要 　建立了用阴离子交换色谱法测定小球藻提取物中的各种核苷酸的方法。用 ShimPack WAX1 色谱 ( μ ) ( ) 柱 50 mm ×4. 6 mm i. d. , 粒度 3 m ,孔径 100 nm , 25 mmol/ L 的磷酸二氢钠水溶液 p H = 3. 5 ,流量梯度 洗脱。检测波长 260 nm 。回收率在97. 50 %～99. 40 % 。该法简便 ,灵敏 ,重现性好 ,可以广泛应用于各类小 球藻提取物和各类食品中的核苷酸的检测。 关键词 　阴离子交换色谱法 , 小球藻 , 核苷酸 1 　引　　言 小球藻为绿藻门小球藻属单细胞绿藻 ,生态分布广 ,生物量大。我国常见的种类有蛋白核小球藻 ( chlorella pyrenoidosa ) ,椭圆小球藻( Chlorella ellipsoidea ) 和普通小球藻( chlorella rulgaris ) 等 ,其中蛋 白核小球藻的蛋白质含量高,营养丰富而被广泛开发利用1 。研究表明 ,小球藻含丰富的蛋白质、脂 质、多糖、食用纤维、维生素、微量元素和活性代谢产物 ,具有防治消化性溃疡、抗肿瘤、增强免疫力等功 效2 。近年来对小球藻提取物的研究日渐深入 , 特别是对其中所含植物性生长因子 ———绿藻精 ( chlorella grow th f actor ) ( CGF) 的研究3 ,有了很大进展。初步实验证明 : CGF 中含大量核苷酸类物 质 ,具有使生物细胞活化的功能 ,可提高机体的免疫力 , 因此具有广阔的开发前景。本实验用所建立的 离子交换色谱法快速检测了小球藻提取物 CGF 中的核苷酸 ,获得了满意的结果。该法简便 ,灵敏度高 , 重现性好 ,为研究和开发小球藻类生物有效物质及其它食品开发中的核苷酸检测提供了较好的方法。 2 　实验部分 2 . 1 　仪器和试剂 ( ) ( ) 1100 高效液相色谱仪 美国 Agilent 公司 ; 二极管阵列检测器 G1315A DAD ; 自动进样器 ( ) ( ) G1313A AL S ; HP 色谱工作站 美国惠普公司 。AMP 、5′dAMP 、CMP 、5′dCMP 、GMP 、UMP 和 5′ d GMP 对照品均购自 Sigma 公司 :水为 MilliporeQ 超纯水。 2 . 2 　色谱条件 ( μ ) ShimPack WAX1 柱 50 mm ×4. 6 mm i. d. , 粒度 3 m , 孔径 100 nm ;流动相 :25 mmol/ L 的磷 ( ) ( ) ( ) 酸二氢钠水溶液 用磷酸调 p H = 3. 5 ;流速 :0. 5 mL/ min 0～6min , 0. 8 mL/ min 6～15 min ; DAD