柳树SSR反应体系的建立与优化.pdfVIP

第35卷第5期 江 苏 林 业 科 技 Vo1．35N0．5 20O8年 l0月 如um0fQ厂 0ngu凡|res￡ sc亡e e c肋 0ct．2O0 8 文章编号：1o01—7380(2008)05一o008一o4 柳树 SSR反应体系的建立与优化 刘恩英，王源秀，孙晨晨，徐立安 (南京林业大学，林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室，江苏 南京 210037) 摘要：以簸箕柳 (5n slzc e sCheng)295I2、绵毛柳 (s。 eroc20如)716为试材，利用正交设计直观分析法和单 因子试验优化柳树 ssR—PcR反应体系，通过研究，确定柳树 10 LSsR反应体系为：DNA模板2Ong左右；Taq聚合 酶 ：O．5u；M ：2．5mmoL／L；dNTP：0．1mm0l／L；引物 (RF)：0．3 mol／L。PcR反应程序为：94℃ 2min；94℃45 s，(Tm一5)℃ 15s，72℃45s，35循环；72℃延伸8min；4℃保温。利用优化的反应体系和程序，对杂种 1O9(簸箕 柳295—2x绵毛柳716)的9o个单株和柳树的其他几个种进行 PcR反应，验证了其可行性。 关键词：柳树；ssR—PcR；反应体系；优化 中图分类号：s792．12 文献标识码：A EstablishmentandOptimizatiOn0fSSR—PCR reacti0nsystem Ofwill0w LIU En—ying ，WANG Yuan．xiu，SUN Chen．chen，XU Li．an (KeyLaboratoryofForestGenetics＆Bi0technology，NanjingForestryUniversity，MinistryofEducati0n，Nanjing2l0037，China) Abstract：Inthispaper，theSSR-PCRIactionsystem ofwiUowwasoptimizedbysinglefact0ran0vaandorthogonaldesign with5。Z 乩 o e ChengandS 2 eroc印 口 ．TheresuItsshowedthatthe1O Lv0lume0fSSR system f0rwiUow contains：about20ngDNA，O．5UniteofTaqDNA polymerse，2．5mmoL／L ofMg ，0．1mmoL／L ofdNTPsand0．3 m0L／L0feachprimer．TheoptimizedPCR cyclesstartedat94℃ f0r2mins，f0llowedby35cycles0f45sat94℃ ，15 sat(Tm一5)cc，and45sat72 ，andthenextended8minsaI72cc．Then，theoptimizedreaci【0nsystemandpr0ce— duI_ewastestedwith9Oindividuals0fF1hybridpopulation1O9(S．s￡cole， Cheng×S．e—ocPnZn)andseveralother wiUowspecies． Keywords：Will0w；SSR-PCR；Reacti0nsystem；AmplicationpmceduIels；0ptimization 柳树( L．柳属树种的统称)属杨柳科(Sali— 本高，又由于SSR标记在近缘种、属间的保守性，目 caceae)，种类繁多(全世界有 520种以上)，分布广 前常利用杨树已大量应用的ssR标记经过筛选后 泛，作为我国重要的阔叶树种和世界各国重要的能 应用到柳树中。不过，ssR技术实验结果的可靠性 源林树种，具有较高的经济和生态价值 J。其基 和稳定性受其PCR反应体系与扩增程序的影响，当 因组较小，均易进行有性及无性繁殖，其中有部分树