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Antigenic variation 锥虫基因组中有1000个基因编码表面抗原 但每个特定时期只有一个VSG基因被表达 启动子调节？ 基因的位置？ 其他机制？ * 转座效应 Transposition of VSG genes occurs by intra- or intermolecular recombination This explains switching but not really why one gene is active and all the others are silent * 碱基的稀有修饰 染色质修饰调控基因表达 实际上发现失活和激活部位的一种特殊修饰（标记为J (b-glucosyl-hydroxy-methyluracil)有差异 But is this a chicken or an egg? * GPI抗原的“漂移”？ 在非洲锥虫病病人的红细胞膜上发现了锥虫的一种GPI蛋白表面抗原！ GPI锚介导蛋白质在细胞表面转移——细胞表面工程 许多细菌、寄生虫毒性蛋白也是GPI蛋白，可把毒素转移给宿主细胞。如何抑制？ * GPI化蛋白的生物合成 核糖体合成新生肽链 内质网腔 N-端去除15~30aa信号肽 C-端去除15~30个aa 肌醇磷酸 GPI锚 GPI化蛋白 细胞质 逐个添加糖基 磷酸乙醇胺 运往质膜表面 * Biosynthetic pathway of GPI-anchor * Proteolytic cleavage at w site Addition of preformed GPI anchor at C-terminus through an amide linkage to the ethanolamine of the GPI anchor Protein can be released by action of cell surface phospholipase GPI = glycosylphosphatidylinositol: lipid modification that anchors proteins to the cell surface GPI化标记 * GPI化蛋白运送到质膜表面的方式 小窝蛋白 * GPI化蛋白的降解 磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2) PLC IP3 DAG PKC Ca2+ GPI蛋白 PLC DAG * GPI化蛋白的生物功能 免疫及神经细胞活化： T细胞活化 神经细胞表面的N-CAM和CNTF受体 与信号转导：脂筏 作为受体 叶酸受体 墨素转铁蛋白(melanotransferrin) * GPI蛋白锚定的优势 可能赋予膜蛋白的较大的横向运动性 通过激活脂酶介导蛋白质的释放和分泌 靶向膜蛋白使其定位于细胞表面特定的区域 通过内吞作用调节细胞表面蛋白质的周转 参与受体介导的传递跨膜信号 * GPI锚定蛋白的鉴定 水解细胞膜表面蛋白的GPI锚 细菌中提取的PI-PLC 锥虫中的GPI-PLC 血清中GPI-PLD 氢氟酸 稀亚硝酸 Western blot鉴定 * GPI裂解位点 Enzymatic and chemical cleavage sites of GPI anchors useful in identifying GPI- anchored membrane proteins. (GPI-PLC) GPI-specific phospholipase C; (GPI-PLD) GPI-specific phospholipase D; (HF) hydrogen fluoride; (HONO) nitrous acid; (NaOH [NH3]) mild alkali treatment with either sodium hydroxide or ammonia; (PI-PLC) phosphatidylinositol-specific phospholipase C. * GPI化蛋白与疾病和药物设计 阵发性夜间血红蛋白尿症 (PNH) GPI化蛋白与细胞表面工程 GPI化蛋白与抗感染药物设计 通过抑制GPI锚结合蛋白从膜上释放而抑制病原毒素向宿主的转移 * GPI蛋白与细胞表面工程 体外GPI化蛋白可从一个细胞转移到另一个细胞表面 细胞表面工程的步骤： 把目的蛋白cDNA与GPI结合必需的C-端肽cDNA融合表达，即可形成新的GPI化蛋白。 提取蛋白质与靶细胞保温，GPI蛋白即可自动组装到靶细胞上。 * 细胞表面工程的优点 制备较大量的GPI化蛋白 可在一些难以基因转染的细胞表面表达目的蛋白 可对细胞表面蛋白进行修饰 多种GPI蛋白可以同时结合在一个细胞表面 * 阵