红树林来源Streptomyces sp.OUC6819中多烯大环内酯类抗生素的生物合成探究.pdfVIP

红树林来源Streptomycessp.OUC6819中多烯大环内酯类抗 红树林来源Streptomycessp.OUC6819中多烯大环内酯类抗 红红树树林林来来源源SSttrreeppttoommyycceesssspp..OOUUC中多多烯烯大大环环内内酯酯类类抗抗 生素的生物合成研究 生素的生物合成研究 生生素素的的生生物物合合成成研研究究 摘要 摘要 摘摘要要 Streptomycessp.OUC6819 分离于我国广东省红树林保护区芦苇根际土壤， 能够产生一类具有抗真菌活性的 32 元多烯大环内酯类化合物(Polyene Macrolides PEMs) Streptomycessp.OUC6819 ， 。本论文以 为研究对象，主要围绕 PEMs的生物合成开展了以下研究工作： 首先，对Streptomycessp.OUC6819 最适的生长条件进行了摸索。在不同培 养基(MS，ISP2，ISP4，COM，高氏)，盐浓度(0%~10%)条件下培养，实验结果 ISP2 28 3.3% pH=7.2 确定最佳产孢培养条件为 培养基， ℃，盐浓 ， 。通过抗性敏 感 实 验 确 定 了 Streptomyces sp.OUC6819 对 Thiostrepton 、 Kanamycin 和 Erythromycin 的敏感性。 其次，成功构建了Streptomycessp.OUC6819 的基因组文库。从Streptomyces sp.OUC6819 中提取基因组 DNA，经过Sau3AI 部分酶切，脱磷，回收35-45kb 左右的 DNA片段，与经XbaI 酶切并脱磷，再用BamHI 处理的载体SuperCos1 相连接，连接产物经包装蛋白包装，然后侵染宿主细胞EscherichiacoliTrans10， 构建成Streptomycessp.OUC6819 的基因组文库。对该文库进行了质量鉴定，结 6 6.0×10 cfu/mL EcoRI BamHI XhoI 果表明：文库的效价达 ，经 、 和 酶切验证基因 文库随机性良好。所建文库的各项指标均达到要求，克隆子分装保存于－80℃冰 箱。基因组文库的构建为次级代谢产物生物合成基因簇的克隆，基因功能研究以 及异源表达奠定了基础。 接着，对Streptomycessp.OUC6819 中多烯大环内酯类生物合成基因簇进行 了克隆与生物信息学分析。研究结果表明，多烯大环内酯类化合物生物合成整个 98kb 14 (Open Reading Frames ORFs) 基因簇共 ，由 个开放阅读框 ， 组成，其中 有4 个I型聚酮合酶(Polyketidesynthase，PKS)基因(opeG、opeH、opeI和opeJ)， 5 (opeA opeC opeD opeE opeF) 1 (opeK) 个可能的调控基因 、 、 、 和 ， 个抗性基因 ， 1 个II 型硫酯酶基因(opeM)，1 个CoA连接酶基因(opeN)和两个未知功能基因 (opeB opeL) PCRtargeting op