应用珠蛋白启动子驱动荧光蛋白在K562细胞中表达.pdfVIP

· 8· 醛州医学院学报2008年2月第31卷第1期 BMU Journal，Feb．2008，Vo1．31，No．1 应用珠蛋白启动子驱动荧光蛋白在K562细胞中表达拳 谢书阳 王萍玉 姚宝洪 焦 飞 王桂兰 杨 成 1滨州医学院生物化学与分子生物学教研室 滨州市 256603；2滨州医学院卫生学教研室； 3滨州医学院中心实验室 【摘要】 目的 应用红系特异性启动子驱动荧光蛋白(绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白RFP)在血液病细胞K562中表 达，以验证克隆所得红系特异性启动子的有效性。方法 应用PCR的方法扩增红细胞系特异性启动子，构建该启动子驱动 GFP基因表达载体和驱动RFP基因表达载体。然后转染K562细胞，用荧光显微镜、RT—PCR分析基因表达的情况。结果 荧 光显微镜示在K562细胞中可见较强的绿色荧光和红色荧光表达，RT—PCR进一步验证了GFP和RFP能在K562细胞中有效 的表达。结论 克隆的红细胞系启动子是有效的，能有效地启动目的基因在血液病细胞中表达，为下一步进行血液病基因治 疗提供科学的资料。 【关键词】 红细胞系特异性启动子；荧光蛋白；基因表达 【中图分类号】 Q75 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001-9510(2008)01-0008-03 Expression of fluorescence protein in K562 cells driven by erythroid·specific promoter XIE Shuyang WANG Pingyu YAO Baohong et al Department of Biochemistry and Molecular Biology，Binzhou Medical University，Binzhou 256603 【Abstract】 Objective Studing the effect of erythroid—specific promoter can effectively drive expression of geen／red fluorescence protein(GFP／RFP)in K562 cells．Methods Erythroid—specific promoter(B globin promoter)was am~ified by PCR from human ge— nome DNA。which was cloned into pcDNA vector to drive GFP／RFP gene expression、Then the vectors were transfected into K562 cells to prove the effect of the promoter by using fluorescence microscopy and RT—PCR．Results Fluorescence microscopy showed that GFP／ RFP can strongly express in K562 cells．And the mRNA was also shown to express effectively by RT—PCR analysis．Conclusion The erythroid—specific promoter can obviously drive gene expression in K562 cells，which is valuable for gene therapy to leukemia as well as other hematology diseases． 【Key words】 erythroid—specific promoter，fluorescence protein，gene expression 人类珠蛋白基因是一种研究人类基因组结构与 1．2 启动子的扩增 从人的基因组DNA中扩增B 功能相关性的理想材料。珠蛋白基因的表达，具有 珠蛋白启动子，引物序列正向：5 一ATFCAAACTFC— 发育阶段特异性和珠蛋白表达的组织特异