两种方法保存嗜酸乳杆菌效果的比较研究.pdfVIP

动物医学进展 。2008，29(11)：37—39 ProgressinVeterinaryMedicine 两种方法保存嗜酸乳杆菌效果的比较研究 朱志宁，赵 燕 ，黄 惠，任晓明 (北京农学院．北京 102206) 摘 要 ：在相 同的温度和时间条件下，比较滤纸片法和甘油生理盐水冻存法保存嗜酸乳杆菌的效果。用 滤纸片法和甘油生理盐水冻存法，分别进行不同温度的嗜酸乳杆菌保存试验 ；并于预定时间内，对各处理组 分别进行复苏及预定检测。在室温和 4℃条件 下，用滤纸片法保存 的嗜酸乳杆茵出现 了生化特性和形态的 异常状况。随着保存时问的延长，滤纸片保存法比甘油生理盐水冻存法的嗜酸乳杆菌存活量 明显减少。两 种方法保存的菌种，均表现为一8O℃组的嗜酸乳杆菌存 活量明显大于一2O℃组。说 明在一80℃温度条件 下，甘油生理盐水冻存法比滤纸片法具有较大的嗜酸乳杆菌存活量。 关键词 ：嗜酸乳杆菌；细菌保存 ；滤纸片法；甘油生理盐水冻存法 中图分类号：$852．6 文献标识码：A 文章编号：1007—5038(2008)11-0037—03 在进行嗜酸乳杆菌的各种试验研究过程 中，对 体 MRS培养基即可L4J。 该菌进行保存是 日常重要工作之一。目前常用的菌 分析纯丙三醇，购 自北京北化精细化学品有限 种保存方法有斜面传代或半固体穿刺菌种石蜡油封 责任公司。生理盐水购 自山东齐都药业有限公司。 冰箱保存法、砂土管保存法、低温保存法、冷冻干燥 微量生化鉴定管为北京陆桥技术有限责任公 保存法和液氮保存法等口]。斜面传代或半固体穿刺 司；滤纸片、试管、培养皿、冻存管等；一20℃冰箱， 的菌种石蜡油封冰箱保存法操作简单 ，应用广泛 。 低温冰箱，显微镜 ，照相机、电热恒温培养箱等。 然而保存时间较短，且需要不断传代 ，因此带来 了因 1．2 方 法 传代而变异L2]，频繁操作易被杂菌污染等问题 。用 本试验每个处理均设 5个平行组，每组分为 3 冷冻干燥法和液氮保存法保存菌种需要特殊设备， 个重复。取本实验室外购并保存 的嗜酸乳杆菌，取 因而在实际应用中受到一定限制口]。本研究采用传 8×10efu／mL菌悬液，在每个固体MRS平板以涂 统且应用广泛的滤纸片保存法以及较为常用的甘油 布接种 0．05mL，37℃厌氧培养。 生理盐水冻存法，对本试验室的嗜酸乳杆菌进行了 1．2．1 滤纸片保存法 将滤纸修剪成 20mm× 保存方法的比较研究。目的在于 ，在相 同的条件下 8mlii的长条状 ，高压灭菌 。于无菌操作 台内，每片 比较两种保存方法对嗜酸乳杆菌的保存效果。旨在 滤纸刮取 lO个左右菌落 。每 3张滤纸片放人一 筛选出简便易行，适用于实验室条件又适合嗜酸乳 只冻存管 中作为一个重复。分别存于室温、4℃、 杆菌特点的保存方法。 一 2O℃、一8O℃条件下作为 4个处理组。 l 材料与方法 1．2．2 甘油一生理盐水冻存法 高压灭菌甘油生理 1．1 材料 盐水。按 8份甘油 2份生理盐水配制冻存液 ]。配 1．1．1 菌种 试验所用嗜酸乳杆菌菌种购 自中国 制方法 ：用 2mL生理盐水顺序冲洗 5只培养皿 ；再 工业微生物菌种保藏中心(CICC)，编号为 6075。 使用 1mL冻存液顺序冲洗该 5只培养皿，将两次冲 1．1．2 培养基及其他材料 液体MRS培养基：蛋 洗的液体充分混匀。将所得的3mL液体分成 l5 白胨 10g，牛 肉浸膏 10g，酵母浸膏 5g，葡萄糖 份 ，每份 0．2mL，分别注入 l5只冻存管中，再于每 2Og，磷酸氢二钾 2g，乙酸钠 2g，柠檬酸二钠 2g， 只冻存管中加入0．8mL甘油，分为5组。分别存于 七水合硫酸镁 0．5g，五水硫酸锰 0．2g，吐温一8O 一