木质部难养细菌（苛养木杆菌）在植株内和体外均产生的胞外多糖的 .docVIP

木质部难养细菌（苛养木杆菌）在植株内和体外均产生的胞外多糖的检测和M. Caroline Roper,1 L. Carl Greve,2 John M. Labavitch,2 and Bruce C. Kirkpatrick1* Department of Plant Pathology,1 Department of Plant Sciences, University of California, Davis, Davis, California 956162 *Corresponding author. Mailing address: Department of Plant Pathology, University of California, Davis, One Shields Avenue, Davis, CA 95616. Phone: (530) 752-2831. Fax: (530) 752-5674. E-mail: bckirkpatrick@ucdavis.edu Received April 20, 2007; Accepted August 29, 2007. 摘要 青枯雷尔氏菌、玉米细菌性枯萎病菌、野油菜黄单胞菌等许多植物病原细菌产生胞外多糖来提高致病力、帮助定殖和存活。胞外多糖也能导致寄主木质部导管堵塞.葡萄彼阿斯病病原菌木质部难养细菌的基因组包含一个操纵子，它很有可能是负责产生黄原胶的黄单胞菌胶操纵子。根据这个报道，人们假定木质部难养细菌能够产生一个类似黄原胶的构成和成分的胞外多糖，但是缺乏甘露糖末端。本研究提高多克隆体以对抗改良的黄原胶聚合物，类似早先测得的木质部难养细菌胞外多糖聚合物。我们用酶联免疫吸附法从木质部难养细菌细胞里定量生产胞外多糖，用免疫定位显微镜检测在体外和植株内形成的微生物膜上产生的木质部难养细菌胞外多糖的分布，并评估木质部难养细菌胞外多糖在PD（彼阿斯病）感染的葡萄的导管闭塞上的贡献率。木质部难养细菌是葡萄彼阿斯病病原菌，也是很多其他重大经济病害的病原菌（21）。此革兰氏阴性菌存活在植物木质部导管，以及在其木质部摄食的害虫载体的前肠和口器上。在这两种环境下，木质部难养细菌均形成微生物膜（3，10，15，29，33）。微生物膜保护微生物生态抵抗抗生素、脱水、寄主防御，还有当使致病基因通过群体感应的协调表达促进黏附和致病时的其他胁迫(16, 41, 48)。微生物膜基质包括核酸、蛋白质、腐殖质和胞外多糖(EPS)。对于细菌表面和彼此的黏附，细菌的胞外多糖是其基质和氨基酸的一个重要的构造成分，以及给成熟的微生物膜传递稳定和结构(2, 42, 48)。除了帮助黏附和稳定，有人假设胞外多糖的粘性性质也帮助集中和稳定细菌产生的水解酶。为了促进遍及葡萄的系统的运动，木质部难养细菌利用植物细胞壁降解酶消化纹孔膜屏障使木质部导管彼此分离(35)。分泌物和捕获酶靠近纹孔膜时，会特别适应木质部液环境。除了集中这些酶，木质部难养细菌胞外多糖也能帮助浓缩和截留因酶促反应产生的水解物，因此该细菌能够将这些产物当碳源利用(20)。 葡萄感染木质部难养细菌有广泛的导管闭塞，呈现与水分胁迫相似但不相同的症状(43)。 Vitis vinifera葡萄彼阿斯病有关的症状包括叶片焦枯（坏死和黄化），浆果脱水，叶片脱落，不规则的周皮发展，地上部生长延迟，最终葡萄藤死亡。这些症状普遍被接受的原因是广泛的导管淤塞(13, 14)。果胶凝胶，侵填体和木质部难养细菌微生物膜有助于导管闭塞(24, 40)。 由于其他植物病原细菌产生参与致病性和有助于导管淤塞的胞外多糖，我们假定木质部难养细菌产生有助于彼阿斯病感染的葡萄导管闭塞的胞外多糖 (9, 26)。 电子显微镜下观察到植株内木质部难养细菌细胞嵌入一个被假定为细菌的胞外多糖的非晶态细胞外基质(3, 29, 40)。除了微观证据，在木质部难养细菌的芯片分析中，基因组有力证明了木质部难养细菌有能力产生类似黄原胶的胞外多糖 (5)。 野油菜黄单胞菌的具优良特征的胶操纵子里发现12个基因，其中9个与木质部难养细菌基因组所包含的9个基因同源，但是与野油菜黄单胞菌的gumI, gumG, gumL没有同源 (1, 37, 46)。这9个木质部难养细菌胶基因也按一个与他们认为的野油菜黄单胞菌同源相似的次序排列。因而，da Silva等(5)提出木质部难养细菌有能力产生一个类似黄原胶的胞外多糖，但是缺失野油菜黄单胞菌的gumI, gumG, gumL同源的基础上，木质部难养细菌胞外多糖很可能丢失重复的侧链的末端mannosyl残留。这些基因涉及野油菜黄单胞菌的末端mannosyl残留的添加和修饰(23)。此外，傅里叶变换红外光谱法分析出，被检测的碳水化合物与木质部难养细菌