核桃蛋白酶解物的制备及抗氧化活性 - chemical journal of chinese .pdfVIP

Vol.34 高等 学校 化 学 学报 No.1 2013年1月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 72~76 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 核桃蛋白酶解物的制备及抗氧化活性 1,2 3 1,3 陈摇 宁 ,孙摇 一 ,刘淑莹 (1. 中国科学院长春应用化学研究所,长春质谱中心,长春 130022; 2. 中国科学院研究生院,北京 100039; 3. 吉林省人参科学研究院,长春 130117) 摘要摇 采用碱性蛋白酶对核桃蛋白进行酶解,检测了所得酶解物的抗氧化能力,包括对 1,1鄄二苯基鄄2鄄三硝 基苯肼(DPPH)和羟基自由基(·OH)的清除能力;利用Sephadex G鄄25 凝胶层析柱和反相柱对核桃蛋白酶解 物进行分离纯化;采用液相色谱鄄质谱(LC鄄ESI鄄Q鄄TOF)联用方法测得抗氧化能力最强的多肽的序列为Ala鄄 Gly鄄Gly鄄Ala,其还原力和还原型谷胱甘肽相当. 关键词摇 核桃蛋白水解;抗氧化;纯化;抗氧化肽 中图分类号摇 O657 摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A 核桃(Juglans regia L)又名胡桃,系胡桃科胡桃属植物,味甘,性温. 核桃营养价值很高, 日常生 活中除少量新鲜食用和加工成休闲食品外,大部分用于榨油,榨油剩余的残粕中含有大量的蛋白质, 但残粕的利用度却很低. 核桃蛋白中含有18种氨基酸,其中有8种必需氨基酸,精氨酸和谷氨酸的含 [1~3] [4] 量很高 . 蛋白质是人体所需的重要营养素之一,在人体内以氨基酸或肽的形式被消化吸收 . 因 此,充分利用好核桃蛋白,可提高核桃产品的附加值和竞争力. 在生物体内,生物大分子的氧化是一个由自由基介导的必要的生理过程. 但是过量的自由基则会 [5~11] [12] 给细胞带来伤害甚至死亡,导致癌症、 中风、糖尿病及心肌梗塞等疾病的发生 . 已有研究 表 明,食物来源的生物活性肽具有在体内清除自由基的能力,并且比合成的抗氧化剂更安全. 目前,对 食物蛋白质来源的酶水解物的抗氧化性研究主要集中在大豆蛋白、小麦蛋白、鹿茸和鱼等[13~16] ,而对 核桃蛋白水解物抗氧化性的研究报道则较少. 本文以碱性蛋白酶(Alcalase2郾4 L)水解核桃蛋白,对获 得的水解产物进行了葡聚糖凝胶柱和反相层析分离纯化,测定了水解物对DPPH和羟自由基的清除能 力,探讨了核桃蛋白水解物的抗氧化活性;对抗氧化能力强的多肽采用 LC鄄ESI鄄Q鄄TOF鉴定了其一级 序列. 1摇 实验部分 1.1摇 材料、试剂与仪器 核桃购自长春沃尔玛超市;碱性蛋白酶Alcalase2郾4 L购自丹麦Novozymes公司;HPLC级乙腈购 自美国 Fisher 公司; 1,1鄄diphenyl鄄2鄄picryl hydrazyl(DPPH),L鄄glutathione reduced(GSH)购自Sigma 公司. WatersAlliance2695高效液相色谱系统;Waters2996二极管阵列检测器;RRLC鄄Q鄄TOF6520 质谱 仪(Agilent公司);ZORBAX Extend鄄C 色谱柱(1郾8 滋m,2郾1mm伊150 mm,Agilent公司);多功能酶标 18 仪(Tecan公司). 1.2摇 核桃蛋白酶解物的制备与分离纯化 1.2.1摇