酶解法提取川贝母组培物总生物碱 - 江苏农业科学.pdfVIP

江苏农业科学　２０１６年第４４卷第９期 — ３１３— 廖　黎，樊　荣，徐文俊，等．酶解法提取川贝母组培物总生物碱［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（９）：３１３－３１５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０９．０９０ 酶解法提取川贝母组培物总生物碱 １ １ ２ １ ２ 廖　黎 ，樊　荣 ，徐文俊 ，刘　昆 ，王跃华 （１．成都大学四川抗菌素工业研究所，四川成都６１０１０６；２．成都大学生物产业学院，四川成都６１０１０６） 　　摘要：为了研究四川道地名贵药材川贝母及其组织培养物有效药用成分总生物碱的提取和含量测定方法，以及总 生物碱含量的变化规律。利用纤维素酶酶解细胞壁中纤维素促进生物碱溶出原理，以酶解温度（Ａ）、ｐＨ值（Ｂ）、酶用 量（Ｃ）和酶解时间（Ｄ）为影响因素进行总生物碱的酶解法正交提取试验，结合饱和Ｃａ（ＯＨ）溶液浸渍和乙醇回流法 ２ 提取生物碱；通过酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果表明，总生物碱的酶解法最佳提取工艺为ＡＢＣＤ，采用 ３ ３ ２ １ 酶解法最佳提取工艺，川贝母及其组织培养物总生物碱提取得率分别提高２８．７４％、４２．８６％，川贝母组培物的总生物 碱含量超过川贝母１１４．０７％。酶解法提高了川贝母有效药用成分总生物碱的得率，经过研发得到的川贝母组织培养 物总生物碱含量呈现快速增长规律，为以名贵道地药材川贝母的新药研发奠定了理论和应用基础。 　　关键词：川贝母；组培物；总生物碱；酶解法；正交试验 　　中图分类号：Ｒ２８４．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０９－０３１３－０３ 　　川贝母（ＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａｃｉｒｒｈｏｓａＤ．Ｄｏｎ）是来源于百合科 ２．１　酸性染料比色法特征吸收波长测定 （Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）贝母属（ＦｒｉｒｉｌｌａｒｉａＬ．）中多种植物的鳞茎，有悠久 精确量取贝母素乙标准品４ｍＬ，置６０ｍＬ分液漏斗中， 的使用历史，早在汉代《神农本草经》中就有记载，将其列为 加水２ｍＬ，加ｐＨ值５．０缓冲液２ｍＬ，加溴麝香草酚兰试液 中品。按其功能一般分为浙贝母与川贝母两大类，浙贝母清 ２ｍＬ，再加一定量氯仿，萃取２次，使２次氯仿加入量与标准 热化痰、开郁散结；川贝母清热润肺、化痰止咳，用于肺热燥 品溶液之和为１２ｍＬ，充分摇匀，放置分层，将下层液经中速 ［１－３］ 干燥滤纸滤过后移入２５ｍＬ容量瓶中，加氯仿至刻度，作测试 咳、阴虚劳嗽、干咳少痰、咯痰带血 。本研究以实验室培 养的川贝母组培物为原料，以贝母素乙为对照品，探索在采用 液。以氯仿同法操作作为空白对照，用 ＵＶ－１１００紫外分光 ［４－６］ ［７］ 酸性染料比色法 前使用纤维素酶进行酶解，再采用饱和 光度仪，在２００～５００ｎｍ波长范围内进行扫描 。得到图１ Ｃａ（ＯＨ）溶液浸渍和乙醇回流浸提工艺提取总生物碱以及 酸性染料法测定贝母素乙吸光度与波长曲线图。 ２ 用酸性染料比色法测定提取物中总生物碱的含量。 由图１可知，贝母素乙标准品在４１１．１ｎｍ波长处有最大 （特征）吸收峰，故选择４１１ｎｍ作为测定贝母素乙的最大（特 １　仪器与材料 征）吸收波长。 １．１　仪器 ＥＳＪ１２０－４电子分析天平（沈阳龙腾电子仪器有限公