关于3、NR活力测定.pptVIP

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2017-07-27 发布于湖北
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关于3、NR活力测定.ppt

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关于3、NR活力测定

实验三、植物NR活力测定——体内法目的：掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法，明确诱导酶含义。原理：植物细胞呼吸代谢 NO3— NO3— NO2— NADH2 NAD NO2— 外界溶液 * 原理： NO2—+磺胺+α –萘基乙烯二胺红色化合物 540nm最大吸收峰测定OD * 材料：在15-25℃ 蒸馏水培养一周小麦苗，实验前一天分两组，一组加KNO3，一组加NH4Cl，在白天置光照下处理。方法：取各组苗地上部0.5g,切成合适长度，放入烧杯中，用玻璃压住材料，加酶促反应液15ml,真空泵抽气10min,加盖后置恒温箱30℃ 20min，取出后立即去除材料。取4ml反应过的液体，加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml,室温放置15min后测540nm OD. 显色、比色测定NR活力。同时作空白：4mlH2O +磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml ?室温放置15min测540nm OD. * 制作NO 2—标准曲线。结果计算： NR活力（NO2—生成nmol/g鲜重.h） =根据OD值从标准曲线上查得的NO2—（nmol）× 3 × 15/4/(?) 结果分析和讨论： 1、比较KNO3诱导和加NH4Cl的NR活力大小，诱导时如用NaNO3 替代KNO3结果会如何，为什么？如不进行光照，结果会怎么样，为什么？ * * 2、亚硝酸是过多施用氮肥后蔬菜中积累的致癌物质，请根据本实验写出简易测定蔬菜亚硝酸含量的方法。 *