关于2.2.2动物细胞的融合与单克隆抗体(上课).pptVIP

* 结合同位素的单抗 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 * 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 融合前提 分散成单个细胞 去除细胞壁 诱导方法 聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒 聚乙二醇、离心、振动、电激、 结果 获得杂种细胞或细胞产物 获得杂种植株 用途 制备单克隆抗体 培育作物新品种 意义 使远缘杂交成为可能 克服远缘杂交障碍 * 对比 比较项目 植物体细胞杂交 单克隆抗体的制备 原理 融合前处理 促融方法 　　 用途 过 程 第一步 第二步 第三步 第四步 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 酶解法去壁 小鼠要免疫处理 物理法　化学法 物理、化学、生物法 原生质体的制备 融合亲本细胞的准备 原生质体的融合与筛选 动物细胞融合与两次筛选 杂种细胞的形成与培养 对产生特定抗体的杂交瘤细胞培养 杂种植株的鉴定 单克隆抗体的分离提纯 单抗有助于疾病的诊断、治疗 获得具优良性状的杂种植株 * ⑶图中B为________过程， 常用_________作为诱导剂 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________ 。 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案 ⑴该实验方案的 目是 ； ⑵A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生 ； 制备单克隆抗体 B细胞 专一抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌专一抗体 无限增殖 * 1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，图10示单克隆抗体制备流程阶段示意图。请据图回答下列问题：图10 （1）该技术是在动物细胞培养技术和 技术的基础上发展起来的。 （2）图10中细胞A体外培养不具有 分裂能力，但能分泌 ， 细胞B体外培养能够 。 （3）动物细胞融合常用的方 法是 。 图10 （1）动物细胞融合（2）分泌特异性抗体 、无限增殖（3）PEG（灭活的病毒、电刺激） * （4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛选出 细胞。在细胞培养过程中，为了促进细胞摄取葡萄糖，常向培养液中加入 （激素）。 （5）培养2周后，即测定培养细胞 的特征，筛选出 细 胞置于不同孔内（如图所示）培养。 此操作前要将培养细胞稀释到 7～10个细胞/ml，每孔滴入 0.1ml细胞稀释液，其目的是 。 （6）要获得大量的单克隆抗体， 可对获得的杂交瘤细胞进行 培养。 （4）杂交瘤、胰岛素（5）特异性分泌抗X蛋白抗体的、保证每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（单一细胞培养以保证抗体的纯度）、（6）体外或体内 * 知识拓展 3.为什么不只用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 * 知识拓展 4.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 * 1.怎样获得能够产生抗体的B淋巴细胞？ 2.骨