关于02 细胞生物学研究方法-4学时.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、细胞内核酸、蛋白质、糖等成分的显示方法 为了对某些细胞成分进行定性和定位研究，利用染色剂可与细胞某种成分发生反应而着色的原理加以显示，称为组织化学和细胞化学染色方法（histochemical and cytochemical staining method）； 如：细胞内DNA和RNA的原位显示 * Myofibrillar ATPase: Identifying Fast and Slow Fibers Succinate Dehydrogenase(琥珀脱氢酶): Identifying Oxidati ve Potential Promoter:GUS * 是根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术，常用的标记物有荧光素和酶 免疫荧光法（immunofluorescent technique） 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method） 免疫细胞化学 immuno-cytochemistry 二、细胞内特异蛋白质的定位和定性 * 免疫荧光法 酶标免疫法 * 利用分子探针检测细胞内特殊DNA序列、和RNA基因表达的方法。 四、细胞内特异核酸序列的定位和定性 原位杂交（in situ hybridization） 人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片 果蝇HB基因表达的原位杂交照片 * 五、定量细胞化学分析技术 对单个细胞进行快速定量分析分选的一门技术； 流式细胞术 flow cytometry * 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 活体或在体(in vivo ) 离体或体外(in vitro ) 细胞培养 (cell culture) 就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术； * 原代培养 (primary culture)：从动物机体取出进行培养的细胞群。 传代培养 (passage)：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 细胞株 (cell strain) 和细胞系(cell line) 一、动物细胞培养cell culture * 二、植物细胞培养 组织培养 (tissue culture)：诱发产生愈伤组织，诱导再分化可培养出再生植株 单倍体培养(haploid culture )：花药或花粉培养获得单倍体植株，人为加倍后可得到完全纯合的个体 原生质体培养(protoplast culture)： * 两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合 (cell fusion)或细胞杂交 (cell hybridization) 基因型相同的细胞融合称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞称为异核体； 诱导方法：生物(病毒)、化学(PEG)、物理(电激、激光)。 三、细胞工程— —细胞融合 * 单克隆抗体技术 monoclonal antibody technique 英国人Kohler和Milstein 1975年将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖 * 显微操作技术 micromanipulation technique * 第四节 细胞及生物大分子的动态变化 一、荧光漂白恢复（fluorescence photobleaching recovery, FRP）技术 * 荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching, FRAP) * 二、荧光共振能量转移技术fluorescence resonance energy transfer * 三、单分子技术single molecule techniques 光镊（Optical tweezers） 磁镊（magnetic tweezers） 原子力显微镜（atomic force microscopy） How do muscles produce works? * 研究生物大分子在细胞内合成、分布、定位等； 一般用3H，14C，32P，35S，135I，45Ca等； 放射性同位素标记→切片或涂片→ 曝光→ 观察 五、放射自显影技术 radioautography 135I * 四、酵母双杂交yeast two-hybrid system 研究蛋白质和蛋白质之间的相互作用。 * 线虫 果蝇 拟南芥 第四节 用于细胞生物学研究的模式生物 大肠杆菌 酵母 小鼠 * 作业题 名词：ultramicroscopic structure, flow cytometry phase contrast microscope ， in vivo,