蛋白质工程和蛋白质折叠.pdfVIP

维普资讯 蛋 白质 工 程 和 蛋 白质 折 叠 扬香娇 陈常庆 【中国科学酷上海生帕化学研究所．上海) 蛋 白质一教结构决定着高级结构。蛋 白质肽链在适宜条件下会 自动卷曲形成其相应的高 级结构 ．即自动发生蛋 白质折叠 ，其 自动发生的原因和过程仍不十分清楚 ，但 是随着蛋 白质 工程的 目益兴起 ，这些与折叠有关的问题也愈显重要，就此 已有文章进行过讨论 (1，2)． 之 ，如把斯兴的蛋白质工程手段 (尤其是基因定点诱变技术)应用来研究这些折叠问题 ． 必梅推动蛋 白质折叠的研究 。本文将就蛋 白质折叠与蛋 白质工程相互影响的一些例子进行讨 论 。． ’ ． 蛋 白质折叠途径 (8) ． 不同蛋白质分子的肽链数 目不同，即使是单肽链蛋白质分子 ．其所含结构域数 目也不一 样。对于多条肽链组成的蛋 白质的折叠来说 ，除了肽链露身韵折叠外 ，还涉及到不同脓链之 间的结合问题，不同前 多肽链蛋 白质的肽链本身折叠与肽链 问结台的先后次序也不同。这里 所指的折叠也将包括肽链间的结合 ．这样，折叠过程就是蛋 白质 由伸展着肽链形成具有特定 空间结构的 自然态蛋 白质 的全过程 。 - 蛋 白质体外折叠都遵循下列过程 ：D—Ir—Iz一…一N。蛋 白质从变性态D开 始 折叠 ． 经过折叠程度逐渐增加的折叠中间体Ii，Iz．…等，最后形成 自然态蛋 白质N。各步折叠速 度不 同，其 中有一步是限速步骤 。如单结构域蛋 白质 ，限速步骤往往 与脯氨酸N端肽键异构 化有关 (3) 。． ． 迄今为止 ．折叠过程 比较清楚的要数BP I的二硫键形成 过 程 (4) 。BpTI是 单 结构 域小蛋 白质，分子内三对二硫键形成过程如图l所示，变性二硫键解开的BPTI(D—BPT1) 首先形成第一对二硫键 f30--~51) ．然后 51~P ；o=sq N—gPTf ● 围IBPTI、 臃蛋 白库抑翻搠)=砘基形成过程 、 图中的中央反应式代表其主要途径，余者支路逮径形成第二对二硫键 C5一 l《)或 (5— 38)，再重排生成含二对二硫键 (30—51]和 [5--55)的折叠中间体，这分子内重排过程 是限速步骤．中间体 (3O—．5l，5—55)快速形成第三对二硫键 [14—38]得 自然~BpTI(N ．16 ． 维普资讯 一 BpTI)而宣告二硫键形成结束。从图1可 以看出除 了上述主要折叠逮径外 ，还存在另外一 些支路途径 ，如果第一对二硫键先是形成二硫键 [5—3O] ，它必须先重 排 成 (3 51]后 才能转八 要折叠连径 。另外更有趣的是 中间体 [so．．-s1，14--~]不能直接形成第三对二硫 硫键 [5—55]而得到N~BPN1，必须先重排成 (80—6Il5-- 14]或 [so．．-sl，5—3g)才 能进一步折叠 可是奇怪的是I4—38是N—BpTl申含有的而5一I4或5—38却是N—BpTl中 所 没有的 。 多结构域单条腻链蛋 白质折叠情况比BpT1复杂 ，曾经有过。骨架模型 和 蛆装 模型 两种方式来描述 [5)。如B一 内酰胺酶是二结构域单条肷链蛋 自质，按照 组装模型 ，两 个结构域先各 自象Bp