Periostin基因增强对胃癌细胞药物敏感化影响及机制.docVIP

　　Periostin基因增强对胃癌细胞药物敏感化影响及机制 第1章绪 论 胃癌（Gastric cancer, GC）是第四大常见恶性肿瘤，全世界每年新增病例约一百万例；它也是第二大因癌死亡原因，每年约有 700000 人死于该疾病[24]。GC 主要发生在发展中国家，尤其是我国发病人数大概占全世界总发病数的 42%。GC 的预后比较差，5年总生存率约为 10%-30%[25]。GC 起病隐匿，早期多无症状或仅有轻微症状。大多数病人在确诊时已处于中晚期。Hundahl 等[26]报道：在美国，65%的 GC 是在进展期（T3/T4）被发现，在确诊时，近 85%肿瘤已发生淋巴结转移。GC 主要治疗方法包括手术，化疗和放疗，手术切除仍是首选方法。然而，高复发率仍是制约治疗效果的关键因素，根治手术后 40%-65%的病人会复发[27]。许多化疗药物已用于术后辅助治疗，对降低或延缓复发具有一定效果。顺铂和 5-氟尿嘧啶是两种化疗常用药物，也被用于治疗进展期 GC。另外，对于发生转移、已失去根治手术机会的 GC 病人，化疗是主要的治疗方法之一。但鉴于肿瘤细胞存在耐药性，相当一部分病例化疗效果不理想。随着分子生物学技术的飞速发展以及对肿瘤发生发展机制认识的加深，分子靶向治疗正兴起为肿瘤治疗的新方法。肿瘤分子靶向治疗是指在肿瘤分子细胞生物学的基础上，利用肿瘤组织或细胞所具有的特异性（或相对特异的）结构分子作为靶点，使用某些能与这些靶分子特异结合的抗体、配体等达到直接治疗或导向治疗目的的一类疗法。与手术、放化疗等传统治疗手段相比，分子靶向治疗具有高特异性，能高效并选择性地杀伤肿瘤细胞，减少对正常组织的损伤。分子靶向治疗方法也为晚期 GC 治疗提供了新选择。有临床研究显示，表皮生长因子受体靶向药物西妥昔单抗（Cetuximab）单独或与化学药物联合在转移性 GC治疗中有一定疗效[28,29]。因而，研究 GC 发生、发展以及耐药性产生机制，鉴定新的治疗靶点，对提高 GC 治疗效果、延长病人生存期有着重要的意义。Periostin 又称成骨细胞特异性因子-2，最初是在成骨细胞中发现，对促进成骨细胞黏附和分化具有重要作用。随着对其研究的加深，发现其在多种肿瘤组织中过表达, 并且具有调控多种肿瘤细胞生物学行为的能力[30,18]。本综述系统总结有关该基因表达调控和功能研究的最新进展，探讨该基因作为治疗靶点在 GC 靶向治疗中的潜在价值。 1.1Periostin 的结构和表达 Periostin是由Takesh ita等于1993年对鼠成骨细胞系M3T3-E1进行减数杂交cDNA筛查是首次发现的，起初命名为OSF-2。后来为了避免与成骨细胞特异性转录因子2混淆，又因早期研究发现其主要在骨膜与牙周韧带中表达, 故将OSF-2改名为Periostin[10]。Periostin蛋白由811个氨基酸组成，其结构为：一个由半胱氨酸富集区连接的典型的信号序列、一个四倍成束蛋白（Fasciclin）区和C末端区域。在结构上，Periostin与昆虫细胞成束蛋白（Fasciclin I）具有高度同源性，后者在果蝇中起到黏附分子的作用，与轴突的引导、迁移和分化有关[30,11]。Periostin的C末端可以进行选择性剪切, 所形成的分子即Periostin的异构体, 称为Periostin样因子，共5种，均具有促进细胞黏附的功能。人Periostin基因位于13号染色体上（13q13.3），其蛋白产物大小为835个氨基酸。除了在正常骨膜和牙周韧带中表达外，Periostin在多数成人组织中均有表达，尤其在主动脉、胃、下消化道、胎盘、子宫以及大部分的胎儿组织中显著表达, 而在脑组织、卵巢和造血器官未检测到表达[31]。需要特别指出的是，Periostin在创伤组织以及多种肿瘤组织中表达显著增强。例如，肌肉损伤、心肌梗死、肺血管重建、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌等中Periostin表达水平升高[32-34,12]。此外，Periostin在纤维化过程中表达水平也比较高，例如支气管哮喘上皮下纤维化和骨髓纤维化[35,36]。Periostin在多种类型细胞中表达，包括内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞等[37-40]。这些研究提示，Periostin在组织发育、创伤愈合以及肿瘤发生发展过程中具有重要作用。 第2章上调Periostin基因对胃癌细胞增殖的影响 DMEM 完全细胞培养液：13.5gDMEM 培养基干粉溶于 500ml 双蒸水中，再用 200ml双蒸水冲洗包装袋内表面使 DMEM 培养基干粉彻底溶解，冲洗液倒入培养液中，进而使 13.5g 干粉尽可能多的溶解入培养液。然后，称得 3.7g NaHCO3 和 2.38g HEPE