功能化树型大分子及纳米复合物基于非病毒载体之基因传递研究.docVIP

　　功能化树型大分子及纳米复合物基于非病毒载体之基因传递研究 第一章绪论 1.1基因治疗 1.1.1基因治疗的概念 基因治疗是本世纪具有重大影响的分子药物形式之一，能够为一系列遗传病和后天疾病提供有力的治疗手段。基因治疗就是将遗传物质引入祀细胞中达到治疗疾病或是延缓疾病入侵的目的。人类疾病中除急性外伤等特殊情况外几乎全部都与基因变异或突变有不同程度的关联。现已知的遗传性疾病有5000多种，其他后天疾病，如心脏病、癌症、糖尿病、关节炎、神经系统疾病以及传染病等也与基因的异常有一定关联。随着科学的不断发展与进步，人类对各种疾病的致病机制有了更加深刻的认识，而基因治疗的迅速发展为现代治疗学开辟了一条新途径。具体来说，基因治疗概念有广义和狭义之分。广义的基因治疗是指应用基因或基因产物治疗疾病的方法，包括DNA疫苗、反义核酸技术和核酶技术。而从狭义上来讲，基因治疗就是将外源正常基因导入-祀细胞中，纠正或补偿基因缺陷或异常引起的疾病，从而达到治疗某种疾病的目的。 1.1.2基因治疗的发展及研究现状 基因治疗的临床应用研究最早可以追溯到上世纪80年代，美国加州大学洛杉矶分校的血液遗传学家Martin Cline教授将重组的DNA导入到两个患血液遗传病的病人体内进行尝试性研究，但未取得成功。但他的这次试验遭到了科学界和伦理界的强力批判，说明当时基因治疗进入临床应用仍存在很大争议，直到1990年，美国才正式批准了世界首例基因治疗临床应用实验方案。1990 年美国的 Michael Blease 和 French Anderson 博士用腺音酸脱氣酶（adenosinedeaminase deficiency, ADA)为一位因ADA基因缺陷导致严重免疫缺损（severebined immune deficiency, SCID)的4岁女孩进行基因治疗[1],这是世界上第一例真正意义的基因治疗临床试验。他们使用携带正常ADA基因的逆转录病毒（RV)转染/这个女孩的淋巴细胞，然后将处理过的淋巴细胞重新输回到患者体内，如此反复治疗之后，患者的SCID得到恢复。自此世界各国都掀起了基因治疗和研究的热潮，经过近二十年的发展，基因治疗已经取得了相当大的进展P]。例如2000年法国巴黎内克尔儿童医院利用基因治疗使得11名有免疫缺陷的婴儿恢复了正常的免疫功能，尽管后来一名儿童患上了白血病，但是这仍是近十年来基因治疗取得的最大成功。而每年用于基因治疗的总投资在10亿美元左右，目前投资主要集中在美国，其次在欧洲。截止到2001年底，全世界己经批准了近600个基因治疗临床试验方案，癌症居首位，共有378个方案，占总数的69%;其次是传染性疾病（主要是HIV)，占9%;单基因疾病、心血管疾病、基因示踪和其他疾病共占18%。截止到2012年，所有的临床试验方案中，恶性肿瘤有1186例案例，占总数64.4%,仍居首位；心血管疾病有155例，占全部临床试验方案的8.4%;单基因疾病有161例，占8.7%;感染性疾病（主要是艾滋病）有147例，占8%;其他疾病有25例，占总数的1.4%;基因示踪有50例，占2.7%。 基因治疗技术理论相对简单，就是将期望基因引入细胞，编码出可以治疗由基因突变引起疾病的功能蛋白质，但事实上比预期困难的多。缺乏安全有效的基因传递方法阻碍了基因治疗在临床上的应用，成功的基因转染需要克服一系列潜在的障碍。首先要解决的就是载体的问题。理想载体可采用简单方法大规模生产，并且这种方法必须具有可重复性。对于许多现今在使用的载体系统来说都是一个不小的挑战，随着科技的不断创新，在许多情况下已经可以克服这一障碍。其次，载体必须能够有效革E向进入患病的细胞，无论是分裂还是不分裂的细胞。研究载体摄入过程，胞内运输过程和基因调控等方面，会有助于设计研发有效的基因载体[4]。 第二章院基化PAMAM树状大分子的修饰及复合物的制备与表征 2.1引言 基因治疗需要依靠高效、安全的载体系统将目的基因传递到细胞内并表达，这也是基因治疗成功的关键。早在1990年，AM树状大分子的细胞毒性..........35 3.1引言........35 3.2实验试剂和仪器设备........35 3.3实验方法........36 3.4实验结果与讨论........37 3.5小结........42 第四章包裹纳米金颗粒的叶酸功能化聚酰胺........43 4.1引言........43 4.2实验材料和方法........44 4.2.1实验试剂和设备........44 4.2.2Au DENPs 与 AuDENPs-FA 的合成........45 4.2.3Au DENPs-FA 与 Au DENPs 的表征........45 4.2.3.1 UV-Vis 和 NMR表征.