大豆黄酮酶基因之克隆与RNA扰乱调控异黄酮含量之研究.docVIP

　　大豆黄酮酶基因之克隆与RNA扰乱调控异黄酮含量之研究 第一章 文献综述 1.1植物的次生代谢 植物次生代谢产物（Secondary metabolites）是指植物中相对于核酸、蛋白质、脂肪酸以及其他承担基本生理生化功能的初级代谢产物之外，一大类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性[1]。植物次生代谢物种类繁多，化学结构迥异，仅已知结构的就有 2 万种以上。其中主要包括：1）酚类化合物，如：类黄酮、醌类等；2）萜烯类化合物，如：单萜、倍半萜、色素苷、柠檬素、羟酸内脂、类胡萝卜素等；3）含氮有机物，包括生物碱、非蛋白氨基酸、生氰糖苷等[2]。植物次生代谢是植物在长期进化中对生态环境适应的结果，对植物在其生态系统中的生存起着重要作用，如：吲哚乙酸、赤霉素等作为植物激素，可直接参与生命活动的调节；一些小分子抗生物质，如萜类、生物碱和类黄酮等，在植物受到病源微生物的侵染后，大量产生并积累，用以增强自身的抵抗力；有些次生代谢产物，如：叶绿素、类胡萝卜素等作为光合色素，参与光合作用；木质素为细胞次生壁的重要组成成份，对维持生命有机体的基本生命过程十分重要[3]。人们对植物次生代谢物的应用由来已久。一些传统草药和香料的有效成分大多是植物次生代谢物。现在，这些天然产物仍在人的生活中起着重要的作用，尤其是为医药、轻工、化工、食品及农药等工业的发展所必不可少的。以医药为例，至今人们依赖于从植物中提取的重要的药物就有五十多种。如：核黄素作为常用临床药物，用于辅助治疗口角炎、眼角膜炎、白内障、眼角膜及口角血管增生等多种疾病[4]；紫杉醇是经FDA认证，目前最好的天然抗癌药物之一，是治疗卵巢癌、乳腺癌的首选药物，对白血病、肺癌、脑癌、直肠癌和其他的一些实体瘤等均有显著疗效[5]。著名的抗肿瘤药物长春碱和长春新碱可用于治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤、急性淋巴细胞型白血病、绒毛上皮细胞癌及其它癌症，其硫酸盐已广泛应用于临床[6]。 1.2 类黄酮的研究 1.2.1 类黄酮的结构与分布类 黄酮（Flavonoids）又称黄酮类化合物, 是一大类具有黄烷核基本骨架（C6- C3 - C6结构）的低分子量多酚类物质的总称，是植物生长过程中形成的一类次生代谢产物[7]。如图1所示，黄烷核由2个芳香环（A环和B环）通过1个中央三碳链连接而成，中央三碳链往往也形成杂环（C环）。根据B环的连接位置、中央三碳链的氧化程度以及中央三碳链是否构成环状等特点, 可将类黄酮分为不同的种类，其中包括异黄酮（Isoflavones）、黄酮（Flavones）、查尔酮（Chalcone）、花青素（Anthocyanins）、黄酮醇（Flavonols）等具有生物活性的物质[8-9]。类黄酮广泛地存在于自然植物中，目前已有超过3,000种化合物被报道，主要分布在维管束植物中，而在其他较低等的植物类群众分布较少。在被子植物中，豆科、蔷薇科、芸香科、伞形科、杜鹃花科、报春花科、唇形科、玄参科、马鞭草科、菊科、蓼科、鼠李科、冬青科，等尤为富集。含有类黄酮的常用中药有槐米、黄芪、葛根、陈皮、枳实、银杏叶、山楂、菊花、野菊花、淫羊藿、射干等。而动物和人类日粮中的豆类中类黄酮含量较多，主要是大豆异黄酮及其糖苷[10]。 1.2.2 类黄酮的功能 黄酮类化合物作为一类植物次生代谢产物，对植物体本身具有多种生物学功能。例如：在植物花、果实和种子中的颜色形成，促进花粉萌发、影响植物的育性，调节植物生长素的运输[11-12]；吸引授粉虫媒和种子传播、抵抗紫外线辐射[13-14]、防止病原微生物侵染[15-16]，从而提高作物的产量；以及植物与根际微生物互相识别中作为信号分子，是根瘤菌形成的重要诱导物[17]。抗生作用是植物次生代谢的一个重要生理功能。在植物的组织器官中，黄酮类化合物的积累是植物胁迫的重要特征，不同生物体对渗透胁迫、病源微生物侵染等逆境的耐性有很大的差异，这与植物体内的黄酮类化合物类型、含量和结构等有密切的关系。具体的，如：花青素（Anthocyanins）作为一种可见的黄酮类色素，可以在某些成熟的果实中产生红和蓝的以吸引食果动物，从而可以帮助植物传播种子[18]。黄酮（Flavones）在植物防止紫外线方面有重要的保护作用，同时可以调节生长素运输和花的颜色[19]。Lygin[20]等（2010）在研究中发现，低浓度的大豆抗毒素（Glyceollin）在体外即可显著抑制大豆上多种病原微生物的生长。 第二章 本课题研究的内容和意义 2.1 本课题研究的内容 本课题研究的主要目的是克隆大豆类黄酮代谢途径中的黄酮合成酶基因及探讨利用RNAi技术提高大豆异黄酮的含量。另一方面，探讨了大豆类黄酮，特别是大豆黄酮与异黄酮对不同大豆病原菌的抗性反