纳米级颅骨替代及诱导材料的研制及应用.pptVIP

纳米级颅骨替代及诱导材料的研制及应用 山东省立医院神经外科 庞琦 纳米级氧化锆/羟基磷灰石具有良好的组织相容性，有助于成骨细胞以及新生毛细血管的长入。 骨膜提取成骨细胞与ZrO2/HAP共同培养，观察其组织相容性和植入体内后的骨传导、骨诱导、骨生成及其血管化情况。 课题创新点 1.骨膜源性的成骨细胞 取材容易，损伤小，细胞品种单一，在体外有较强的增殖能力和成骨特性 2. ZrO2/HAP 良好的组织相容性和骨诱导能力 ，增加材料的韧性和强度 3.微血管生成 定性及定量评估成骨状况及微血管生成 材料制备 化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石粉体 球磨工艺制备ZrO2/HAP复合粉体 冷轧成型再无压烧结成ZrO2/HAP复合纳米材料 透射电镜显示材料颗粒度小于100nm 主晶相为纳米HAP和单斜相ZrO2 修复材料呈灰黑色块状，孔隙率80-90%，孔径100～400?m 颅骨骨膜通过酶消化和组织块培养获成骨细胞 成骨细胞与ZrO2/HAP体外行复合培养 检测成骨细胞生物学变化和材料的生物相容性 形态学观察； 细胞Giemsa 染色、甲苯胺蓝染色 接种后第1～8天测定相应板的MTT值并 绘出细胞生长曲线 骨特性的鉴定 碱性磷酸酶染色（ALP） 钙化结节染色 材料联合培养组 预制好的复合材料 单纯细胞培养组。 单纯接种细胞， 成骨细胞培养 细胞染色与钙化结节染色 成骨细胞与支架材料联合培养 生长曲线测定 碱性磷酸酶检测（ml/mg蛋白质，n=24, X ±S） 凋亡比较 种子细胞要求增殖能力强，短时间体外培养可获得大量成骨细胞;成骨能力强，植入后能较快形成新骨替代支架材料 本课题采用骨膜的成骨细胞做为种子细胞，取材简便，创伤小；含量丰富，成活容易，成分单一,生长增殖旺盛 成骨细胞典型的标志酶是碱性磷酸酶,成熟成骨细胞的代表性特征是较高的碱性磷酸酶（ALP）活性和体外能形成矿化结节 支架材料 影响种子细胞的生物学特性和培养效率 影响周围组织靶细胞表达生长因子受体 靶细胞迁移到受损区，刺激生长与分化 纳米ZrO2/HAP 氧化锆具有强度高、韧性好等优异的力学性能及良好的生物相容性， 　羟基磷灰石在纵向排列的胶原纤维束上结晶 　　　氧化锆模拟胶原纤维束，得到纤维增强羟基磷灰石复合生物材料，以提高力学性能。 良好的生物相容性、骨传导性、可降解性、可塑性，而且反应产生的热量少， 成骨细胞与支架材料的相互作用 材料表面的局部形态、表面能或化学能决定了细胞吸附、定位（Orientation）及功能行为 细胞与材料粘附的质量影响形态学变化、增殖及分化能力。 ZrO2/HAP有大量的孔隙，利于细胞生长，同时诱导成骨细胞沿孔隙方向生长，达到骨引导的作用 骨样磷灰石的形成与局部环境的生化中介共同作用，表现出的生物活性，产生骨融合和骨诱导 体外复合培养的ZrO2/HAP与骨膜源性成骨细胞在多孔态的三维空间中正常生长增殖，形态正常，并有成骨 复合培养的成骨细胞能够保持正常的分泌碱性磷酸酶的功能。证明ZrO2/HAP有良好的生物相容性和骨诱导 复合培养的成骨细胞在数量、周期及凋亡率与体外单纯培养的成骨细胞比较，无显著差异 成骨细胞复合ZrO2/HAP修复颅骨缺损的组织相容性研究 ZrO2/HAP作为载体材料与兔骨膜来源的成骨细胞复合培养，并移植于兔颅骨缺损处，通过影像学，组织学及电镜观察兔颅骨缺损的修复情况，以及新型复合材料的生物相容性 实验动物分组 纯种新西兰大白兔40只，雌雄不限，兔龄1个月，体重2-3Kg，右侧颅骨为实验侧 实验组I： 20只。复合材料组I右侧颅骨植入已培养7天的ZrO2/HAP与成骨细胞的复合材料，单纯材料组左侧颅骨单纯ZrO2/HAP材料 实验组II ： 20只。复合材料组II右侧颅骨放置ZrO2/HAP与成骨细胞的复合材料, 左侧放置硅橡胶颅骨称硅胶组 颅骨缺损模型 兔颅骨缺损处植入复合材料（右），左为单纯材料。 兔颅骨缺损处植入复合材料（右），左为硅胶 观察项目 （1）X线检查：在术后4、8、12周对实验及对照侧骨缺损行X线检查，并对各组X线平片按Lane评分标准评分，对修复进行量化分析。 （2）生物相容性检查：制备实验动物的血液涂片及骨髓涂片，常规Giemsa染色，观察实验动物血象及骨髓象。 （3）扫描电镜观察：取第4周、第12周的实验组Ⅰ、实验组Ⅱ修复材料