机械牵张对成骨样细胞影响之糖蛋白组学初步研究.docVIP

　　机械牵张对成骨样细胞影响之糖蛋白组学初步研究 第一部分 机械牵张力对成骨细胞的影响及相关机制 牙槽骨具有高度可塑的特性，也是全身骨骼中变化最为活跃的部分。矫治器作用于牙齿，正畸机械力通过牙体硬组织、牙周膜传递至牙槽骨，引起牙槽骨组织改建。在受压侧牙槽骨骨质吸收，在牵张侧骨质沉积，两者同时进行达到新的平衡，牙齿因此移动到新位置，这也是正畸矫治错合畸形的基本原理。第一篇报道正畸牙齿移动的机理是 Sandstedt 关于狗牙齿移动的实验研究，阐明了压力侧破骨细胞活跃且出现透明样变而表现为骨吸收，张力侧成骨细胞活跃表现为新骨形成[1]。继而展开了从组织水平、细胞水平到现在广泛的分子水平研究牙齿移动机理。1987 年 Frost[2]的机械阈值理论解释了在失重状态下宇航员的骨密度会降低，长期卧床病员骨钙化密度降低[3][4]，牙齿缺失患者也会因为缺少局部的功能刺激而导致废用侧牙槽骨的萎缩。当骨形变高于最低有效应变量(The minimum effective strain ，MES)时，便通过改变骨、肌腱、韧带、筋膜的生长去适应新的机械环境，影响骨重塑活动，导致纤维组织变薄，骨干及骨松质骨质减少，脆性增加。使拉力趋于原有阈值水平。在牵张侧牙周纤维被拉伸，从生理负荷状态变成高负荷状态，表现为骨沉积；受压侧牙周纤维从生理负荷状态变成低负荷状态，表现为牙槽骨吸收。 成骨细胞（osteoblast，OB）作为对机械力反应敏感的效应细胞，力效应细胞（mechanocytes）[5]，负责骨基质形成和钙化，在骨组织重建中发挥重要作用。 1 机械力对成骨细胞的影响 1.1机械力对成骨细胞的细胞骨架及细胞形态改变 细胞骨架是胞内的张力框架，参与了多种重要的生理和病理反应。力学受体通过与胞膜上直接联系的分子将力学信号在胞内传递，再经效应分子最终表现在效应点上。最新研究表明，机械力刺激引起的细胞信号传导网络中，重要一环包括细胞骨架系统的改变。戚孟春等的研究发现对大鼠颅骨成骨细胞施以 2000mu;epsilon;、0.5Hz 的机械力，细胞骨架 F-actin 出现解聚和重排，并诱发细胞凋亡[6]。Akhouayri 等通过研究发现在动态载荷作用下，成骨细胞形态变圆；而在静态载荷作用下，细胞则被拉伸并沿其长轴排列[7]。Bhatt KA 等使用 Flexcell 加载仪对人成骨细胞施以单轴机械牵张力，结果发现空白组的人成骨细胞呈星状且随机排列；而实验组的形态变为梭形、纺锤形，肌动蛋白的微丝呈平行排列。提示机械力刺激成骨细胞导致形态学改变[8]。Buckley 等对鸡颅骨骨细胞施以周期性载荷，结果表明：机械载荷不但促进细胞分裂，而且细胞与载荷方向相垂直，列为一线;同时由于应力作用，胞外基质可在通常不能矿化的条件下矿化[9]。Geng C3T3-E1，发现 I 型胶原、骨钙素、RUNX2 的基因表达增加[12]。唐丽灵等的实验中对比了 500mu;epsilon; 和 1000mu;epsilon; 两种不同力值对成骨细胞增殖的影响，发现 500mu;epsilon; 可明显促进细胞增殖，而 1000mu;epsilon; 实验组表现为增殖减少[13]。 1.3对骨代谢相关因子的调节及其机制 Cillo JE Jr 等对成骨样细胞施以连续的周期性机械拉伸力，发现骨代谢相关生长因子改变。8h 后实验组 TGF-beta;1 和 IGF-1 的 mRNA 增加，bFGFT降低。16h 后三者 mRNA 全部增加。然而分解代谢的细胞活素类并未受影响[14]。这说明成骨细胞为响应力学刺激其成骨性生长因子的合成增加，从而调节骨重塑。IL-1 是一种具有多种生物学活性的细胞因子，在炎症和免疫反应中发挥重要作用。有研究表明，IL-1 对成骨细胞 DNA 合成、细胞增殖、胶原合成以及碱性磷酸酶的表达有促进作用[15]。Fong 用 10％的持续单轴牵张力作用于鼠成骨细胞，发现力学刺激通过上调细胞核抗原蛋白、 TGFbeta;1 mRNA 来促进成骨细胞的活化和增殖[16]。简烁等研究表明低重力负荷状态下骨钙素、胰岛素样生长因子 1、碱性磷酸酶 mRNA 表达减少，凋亡增多，抑制成骨细胞的成骨能力，促进成骨细胞骨吸收、骨形成代谢紊乱以及骨形成抑制是失重状态下骨流失的重要原因[17]。Tokimasa C 等的研究发现不同的局部生长因子调节骨改建。机械力刺激下信号转导调节骨组织的生长和合成代谢，刺激成骨细胞的胶原合成，促进骨折愈合，同时参与生长激素诱导骨生长的调节[18]。 第二部分 糖蛋白组学研究的应用进展 糖组学是继基因组学和蛋白组学后新兴的研究领域，呈指数方式扩大基因信息，其研究结果直接关系到是否能阐明基因及细胞功能。现在的糖组学已经发展为以凝集素亲和层析或化学衍生富集