结核免疫应答有关基因多态化与肺结核易感化之关联研究.docVIP

　　结核免疫应答有关基因多态化与肺结核易感化之关联研究 第一部分 细胞因子及其受体基因多态性与肺结核易感性的关联研究 细胞因子是一类参与病原体感染免疫应答的免疫分子，能够调节所有细胞的免疫应答，在机体抵抗病原体的感染过程中发挥着重要的作用。虽然机体抵抗分支杆菌感染的机制还不是很明确，但是来自于实验模型和细胞因子及其信号通路中基因或药物引起缺陷的证据表明，细胞因子在重要胞内病原体的感染中发挥着重要作用[26-28]。对胞内寄生菌结核分支杆菌也不例外，细胞因子是结核杆菌与细胞相互作用分泌的分子，无论是作为效应分子还是调节分子在结核分子杆菌的天然免疫应答和适应性免疫应答中发挥着重要的作用，同时表达于白细胞分化抗原簇4阳性（Cluster of differentiation 4 positive，CD4+）的T细胞的细胞因子在Th1样免疫应答中占主要的优势，并且与病原体感染控制相关[29]。在参与结核病免疫应答的细胞因子中，最主要的细胞因子包括TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-12、IL-10、IL-6、IL-17和IFN-gamma;。研究显示，TNF-alpha;基因缺陷的小鼠对结核分枝杆菌感染的易感性明显增强，并且还参与了肉芽肿的形成；IL-1介导的信号通路是宿主防御M.TB感染的重要组成部分，研究表明，M.TB感染所导致小鼠低水平IFN-gamma;的产生、肉芽肿形成的缺陷和较低的生存率与 型IL-1受体基因剔除相关。IL-12p40（IL-12beta;）是由M.TB感染所诱导的细胞因子，依赖于M.TB感染的肺泡巨噬细胞中IFN-gamma;的表达，该细胞因子的缺陷能够导致人类对分枝杆菌病的易感性[30]，其信号是通过IL-12Rbeta;1的结合IL-12beta;R2或者IL-23R来完成[31]，而IL-12Rbeta;1基因的突变与结核病的易感性密切相关[32]。IL-10和IL-6共同调节机体对结核杆菌的免疫应答，IL-10能够通过下调IL-12的产生，抑制巨噬细胞的活性，进而影响T细胞IFN-gamma;的产生；同时IL-10能够直接抑制CD4+的T细胞的应答，以及结核杆菌感染细胞抗原呈递的能力[33]。虽然IL-6能够抑制T细胞的免疫应答，但是在其缺陷的小鼠中，能够导致病原体的载量过早升高以及IFN-gamma;表达的下降[34]，说明IL-6在初始天然免疫应答中的重要作用。暴露于高剂量的结核杆菌卡介苗，gamma;delta;T细胞所产生的IL-17高效的免疫应答为快速的炎症反应和对机体的保护是必须的[35-37]。IFN-gamma;表达于CD4+和CD8+的T细胞和自然杀伤（Natural killer，NK）细胞，是控制结核感染的一个关键性的细胞因子，能够激活巨噬细胞杀伤和清除结核杆菌以及提高MHC抗原呈递的能力[38]。而IFN-gamma;在人类抗结核防御中所发挥的关键作用主要表现在增加了IFN-gamma;的受体或IL-12R缺陷的患者对分枝杆菌感染的易感性[39]。 本研究拟选取在汉族人群肺结核尚未开展或者开展较少的功能性SNPs位点，包括TNF-alpha;基因启动子的rs1800630和rs1799724位点，IL-10基因rs1800871，IFN-gamma;基因rs2430561，IL-12beta;基因rs3213094、rs3212227、rs6887695和rs1368439，IL-1beta;基因rs1143634和rs16944，IL-12beta;基因rs6887695、rs3213094、rs3212227、rs1368439和rs7709212，IL-12Rbeta;1基因rrs375947等位点与肺结核易感性进行关联研究；同时，对新的候选基因IL-6、IL-6R、IL-17和IL-23R的标签SNPs进行研究，探讨这些基因的SNPs位点与中国汉族人群肺结核易感性的关系。为验证我们的研究假设，我们纳入了在河北省胸科医院和石家庄市第五人民医院进行结核病治疗的经临床和实验确诊的923例汉族新发肺结核病例和1033例在北京电力医院进行健康体检汉族正常人群作为对照人群，检测并分析了这些多态性改变的基因型和单倍型与肺结核风险的关联。同时，对-863Cgt;A位点与血清中TNF-alpha;表达水平的关系进行了研究。 第二部分 趋化因子基因多态性与肺结核易感性的关联研究 趋化因子是一类参与调节免疫细胞的趋化运动及免疫功能分子，通过趋化因子受体介导而招募免疫细胞到免疫应答局部，在机体抵抗结核分枝杆菌感染，单核巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞向炎症部位趋化和组织慢性炎症及肉芽肿形成的过程发挥着重要作用[63]。单核细胞吸附蛋白 1（Monocyte che