降解水葫芦中纤维素的优良菌株的筛选.pdfVIP

第l6卷第2期 纤 维 素 科 学 与 技 术 、，01．16 No．2 2008年6月 Journal of Cellulose Science and T~chnolo~ Jun．2008 文章编号：1 004-8405(2008)02-0053-06 降解水葫芦中纤维素的优良菌株的筛选 邱晔平， 杨晓瑞， 朱建良幸， 陈晓晔 (南京工业大学 制药与生命科学学院，江苏 南京 210009) 摘 要：在腐烂的水葫芦中利用刚果红平板染色法分离筛选具有产纤维素酶活性的 四株菌株，通过考察其产纤维素酶活力及降解水葫芦的水平，从而筛选出一株产纤 维素酶活较高同时能高效降解水葫芦的优良菌株D1。在降解水葫芦的过程中，CMC 酶活最高为2．262~mol／min·mL，滤纸酶活最高为1．592 pznol／min·mL。D1菌株发酵 液中1O天左右的还原糖质量浓度达到2．273 g／L，14天降解水葫芦达到39．13％。经 初步鉴定该菌株为绿色木霉。 关键词：水葫芦；纤维素酶；真菌 中图分类号：Q55 文献标识码：A 水葫芦又名风眼莲，是一种水生漂浮草本植物，它的繁殖能力强，喜高温，适宜生长在 富营养化的水体中【lJ。近年来，由于水体污染严重造成水葫芦大量泛滥，不仅破坏生态环境， 阻塞河道，影响水运【2J，同时在生长过程中消耗了大量的溶解氧，腐烂后造成二次污染，加 剧了水体的富营养化【3 J。水葫芦的泛滥成灾既引起了严重的环境问题又造成了资源浪费。 因此合理开发和科学利用这一丰厚的天然资源是整治水葫芦问题的关键。 水葫芦含有十分丰富的蛋白质、氨基酸、胡萝卜素和微量元素，其碳氮比对于厌氧发酵 制各甲烷十分适宜【6- 。周岳溪等人 J研究发现水葫芦单相厌氧生物工艺运行过程中存在的 池容小、产气率低、易结壳、出料不便等问题，主要是由于目前水葫芦的降解利用还没有达 到令人满意的水平，缺乏对水葫芦高效降解的高活性菌株。本文通过在腐烂的水葫芦中采集 和筛选大量菌株后得出一株优良菌株，并对其产酶特性和对水葫芦的降解性能进行了初步研 究。该菌株不仅对水葫芦有较好的降解能力并能产生大量的纤维素酶，对水葫芦的进一步的 降解利用有一定应用价值和良好的经济效益 J。 1材料与方法 1．1 样品来源 样品为富含纤维素分解菌的腐烂的水葫芦。采样源为南京城郊某池塘。 1．2 发酵原料 将水葫芦自然风干后粉粹，过20目筛。 收稿日期：2007-08-16 作者简介：邱哗平 (1982～)，女，硕士研究生；研究方向：可再生资源的利用。 ·通讯作者：朱建良(1964--)，男，教授，博士；研究方向：可再生资源的利用。 54 纤 维 素 科 学 与 技 术 第16卷 1．3 培养基 1．3．1分离培养基 PDA培养基为马铃薯琼脂培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蒸馏水l L， 自然pH值。 羧甲基纤维素钠培养基：羧甲基纤维素钠 l0 g，(NH4)2SO4 4 g，KH2PO4 2 g，MgSO47I-I20 0．5 g，NaC1 0．5 g，蛋白胨l g，琼脂20 g，蒸馏水l L。 1．3．2 水葫芦产酶发酵培养基 水葫芦2．5 g，(NH4)2SO4 0．8 g，KH2PO4 0．2 g，蒸馏水50 mL，12112湿热灭菌l h。 1．4 目的菌株的分离与鉴定 菌株纯化：将采集的腐烂水葫芦取部分根茎叶在无菌水中冲洗，置于己准备好的PDA 培养基进行分离培养，培养温度2812，培养时间5天，培养皿6套。经5天分离培养，分 离组织周围先有细菌菌落生长，而后有真菌菌丝生长，用接种针在无菌工作台挑取菌丝接种 到预制好的PDA平板，继续培养观察。重复多次后得到l8株纯化的菌株，再转接到羧甲基 纤维素钠培养基，对各菌株所产的纤维素酶进行初步鉴定。 产纤维素酶的菌株的筛选：将分离所得的菌株以3点法在CMC-Na培养基上种植，28 ℃恒温培养72 h后，采用0．2％刚果红染色30 min，然后依次用蒸馏