黄瓜AFLP反应体系的优化.pdfVIP

硒此虐 业学报 2008，17(3)：27卜273 Acta Agriculturae Boreali—occidentalis 黄瓜AFLP反应体系的优化 张素勤 。 ，顾兴芳 ，张圣平 ，王晓武 ，邹志荣。 (1．中国农业科学院蔬菜花卉研究所，jE京 100081；2．贵州大学农学院，贵阳 550025； 3．西jE农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 7l2l00) 摘 要：对影响AFLP(Amplified fragment length polymorphism)扩增的关键因素进行了摸索，以期获得清晰 稳定的黄瓜 AFI P反应体系。结果发现，最佳的预扩增体系为：20反应体系中包含 0．5 U Taq DNA poly merase、2．0 I dNTP(2 mmol／L)、1．2 L 25 mmol／L Mg 、0．6 L 50 ng／t~L每种引物、1×PCR Buffer和4 I 模板DNA；最优的选择性扩增体系为20 I 反应体系中含有 1．0 U Taq DNA polymerase、2．0 L dNTP (2 mmol／I )、l_0 L 25 mmol／L Mg 、1．0 I 50 ng／ I 每种引物、3．0 tH 稀释 40倍的预扩增产物和 1× PCR Buffer。体系优化后，扩增产物稳定，条带十分清晰，无背景干扰。 关键词：黄瓜；AFI P；反应体系；优化 中图分类号：Q781 文献标识码：A 文章编号：1004—1389(2008)03—0271—03 Optimization of AFLP Reaction System in Cucumber ZHANG Su—qin ，。 ，GU Xing—fang ，ZHANG Sheng—ping ， WANG Xiao—wu and ZOU Zhi—rong。 (1．Institute of Vegetables and Flowers of Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China； 2．College of Agriculture，Guizhou University，Guiyang 550025，China；3．College of Horticulture， Northwest AF University．Yangling Shaanxi 712l00，China) Abstract：The key factors influencing AFLP(amplified fragment length polymorphism)amplification were researched in order to establish a highly stable and optimized AFI P reaction system in cucumber in the present study．The results showed that the optical pre—amplification system WaS 20 I reaction mix containing 0．5 unit of Taq DNA polymerase，2．0 I of dNTP(2 mmol／L)，1．2 L of 25 mmol／ L Mg ，0．6 I of each primer(50 ng／／,L)，4 L of template DNA and 1×buffer；the optimized se lective amplification protocol was 20 uL reaction mix containing 1．0 unit of Taq DNA polymerase，2．0 L of dNTP(2 mmol／L)，1．0 L of 25 mmol／L Mg ，1．0 I of each primer(50 ng／~I )，3．0／,I of 40× diluted product of