HPLC法测定汉中参叶中人参皂苷Rd含量.docVIP

HPLC法测定汉中参叶中人参皂苷Rd含量【摘要】目的:建立HPLC法测定汉中参叶中人参皂苷Rd的含量。方法:筛选适当提取方法,色谱柱:Inertsil ODS-sp(5μm,4.6mm×150mm);流动相:乙腈-水(32:64);柱温:30℃;流速:1.0ml/min;检测波长:203nm;高效液相色谱仪测定峰面积。结果:人参皂苷Rd线性范围在9～90ug,γ=0.9998,平均回收率为99.77%,RSD为1.67%。表明该法适用于汉中参叶中人参皂苷Rd的含量测定。结论:本法准确、快速、简便。 【关键词】汉中参叶;人参皂苷Rd;HPLC 【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)18-033-2 汉中参叶,即珠子参叶。为五加科人参属植物珠子参Panax japonicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥地上茎叶。为陕西秦巴山区民间习用药材,具有清热生津、润喉利咽、安神的功效。主要用于肺热口渴、喉干舌燥、暑热生津、头晕目眩、心焕神散疲等的治疗。民间多以单叶入茶饮用,歌舞艺人常用来保护嗓音,保持体力,解暑。现化学研究表明,汉中参叶富含多种人参皂苷类成分,如人参皂苷Rd、Re、Rg1、Rg2和F2,珠子参苷F1,F2,F3,F4,F5,F6[1-3],此外,尚含多种氨基酸及微量元素[4];药理研究表明,汉中参叶总皂苷可对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,减少醋酸致小鼠毛细血管通透性增加,抑制肉芽组织增生;对热板引起的疼痛有一定的镇痛效果;能延长缺氧条件下小鼠存活时间[5-6]。为此,本实验采用HPLC法建立汉中参叶中人参皂苷Rd的含量,为客观准确评价汉中参叶药材质量,合理开发利用汉中参叶药材资源提供科学依据。 1仪器与材料 1.1仪器岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪;Shimadzu LCsolution工作站;SB-3200D型超声清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司,180w,40kHz);BP-121S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。 1.2样品与试剂汉中参叶采自陕西宁强,经陕西中医学院药学院中药标本馆高级实验师王继涛老师鉴定为珠子参Panax japonicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥地上茎叶。人参皂苷Rd对照品(中国固体制剂制造技术国家工程研究中心提供);乙腈为色谱纯(SK Chemicals公司),水为娃哈哈纯净水,其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:Inertsil ODS-sp(5μm,4.6mm×150mm);流动相:乙腈:水(32:64),检测波长:203nm,流速:1.0ml/min;进样量:10μl;柱温:30℃;理论板数按人参皂苷Rd峰计算应不低于3000。 人参皂苷Rd对照品和供试品HPLC图谱见图1、图2。 2.2对照品溶液配制精密称取人参皂苷Rd对照品4.5mg,置于10ml量瓶中,加甲醇溶解、定容,摇匀,待用。 2.3供试品溶液的配制取参叶粉末2g,精密称定,置锥形瓶中,加甲醇50ml超声处理30min,过滤,滤液蒸干,加水分散,石油醚反复萃取,每次20ml,弃去石油醚层,再用水饱和正丁醇萃取3次(分别为20、15、15ml),合并正丁醇层,水浴蒸干,残渣用少量甲醇溶解、并转移定容至5ml量瓶中,备用。 2.4线性关系考察分别精密吸取人参皂苷Rd对照品溶液2、5、10、15、20ul注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以人参皂苷Rd进样量(ug)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=126191X-39983,r=0.9998。结果表明,人参皂苷Rd在9～90ug范围内线性关系良好。 2.5精密度考察取同一供试品溶液,照“2.1”项下色谱条件,重复进样5次,每次10ul,测得人参皂苷Rd峰面积的RSD为1.7%,表明本方法精密度良好。 2.6稳定性考察取供试品溶液分别于0、2、4、8、12、24h进样,每次10ul,记录峰面积,计算人参皂苷Rd的RSD为1.8%,表明供试品溶液在24h稳定。 2.7重复性考察取同一批样品5份,按2.3项下方法制备供试品溶液,每份进样10ul,测得人参皂苷Rd含量的RSD为0.4%,表明本方法重复性良好。 2.8加样回收率试验取已知含量的汉中参叶粉末约0.1g,共5份,精密称定,分别准确加入人参皂苷Rd对照品,按2.3项下方法制备供试品溶液,每份进样10ul测定人参皂苷Rd的峰面积,计算平均回收率99.77%,RSD=1.67%(见表1)。 2.9样