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体外受精精液处理方法比较[中图分类号]11321-33　[文献标识码]B　[文章编号]1672-4208(2009}07-0073-02 体外受精是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。我院自2007年5月～2008年5月共收集精液标本97份，分别采用3种不同处理方法进行分析，现报道如下。 　1　材料与方法 1.1　精液标本的收集(1)男方禁欲5～7天(过长或过短的禁欲时间均有碍精子的质量)，取精前排尿1次，肥皂洗手3次，用手淫法将精液收集于一无菌采精杯中(着手淫法困难的患者可改用性交法取精，如有患者不习惯医院环境，可在院外取精并于半小时内送至医院，运送过程中注意保温)，立即放入37℃培养箱。使其液化。用巴氏吸管吹打使其混匀。滴1滴于玻片上，镜检。(2)若患者的精液粘稠或有抗精子抗体，可将精液收集在一个含有培养液的无菌采精杯中，精液量过少者，可分段收集精液标本。(3)逆行射精：向患者仔细地解释整个过程，在实验前一晚的9时，要他将4 gNatlCO3放入500 ml水中，混匀服下，在取精前1h，再饮一杯4 gNaHCO3的水并且再多饮1～2杯水：在射精前排尿(小便后立即射精)，射精后将小便排入一含有5％血清HEPES～HTF液的容器中，逆射出的精子必须立即检查和处理。 1.2　精液处理　试剂：a精子洗涤培养液：含10％SPS的HTF液。10％SPS的HTF：1 mlSP+9mlHTF液b梯度离心液：Isolate密度梯度离心液。a混匀离心法：取一支尖底离心管，加入1.5 mlHTF液，再加入1.5 ml液化后的精液即一份精液加一份洗净液稀释，用巴士吸管吹打混匀后，放人离心机中，1500转/min，离心8 min后取出。弃上清液，缓慢加入1mlHTF液悬浮。放入37℃培养箱中待用。b上游法：取两支圆底试管，各加入1 mlHTF液，再小心地将1 ml液化后的精液注入HTF液下部。斜45度静置30 min后，收集上层云雾状培养液置于离心管中，1500转/min离心8 min后，弃上清液，缓慢加入1 mlHTF液悬浮，放入37℃培养箱中待用。c Isolate密度梯度离心法：取一支尖底离心管，先加1.5 m140％Isolate上层液后再加入1.5 m190％Isolate下层液于底部(每层梯度量必须是1:1)，再加入1～1.5 ml液化的精液，2500转/min离心20 min。去上清液，用巴氏吸管吸取1 mlHTF液后再吸出沉淀，同置于另一支离心管中混匀，1500转/min离心8 min。弃上清液，缓慢加入1mlHTF液培养悬浮待用。 2　结果 在选择处理精液的方式前，要根据镜检结果为依据，上述3种方法收集的精液均调至(0.1～0.15)×106个/ml。进行体外受精，结果见表1。 3　讨论 体外受精处理精液的目的有两个：通过各种处理方法得到优质的精子；尽可能去除精浆中所含精子获能抑制因子、前列腺素、死精、不活动精子、白细胞及一些杂志碎片等有害成分，从而提高精子获能及受精能力。混匀离心法具有操作简便，技术要求低。回收率高的优点，但其适用范围窄，只能针对那些精子数目正常，动力良好且精浆颗粒团块少的标本。 上游法操作简便，步骤少，技术难度低，在改进为两或多管上游后，可以明显提高优质精子的回收率，其缺点是回收率较其他两种方法仍然偏低，仅适用于精液质量在中等以上的患者，存在这适用范围的局限性。密度梯度离心法具有广泛的适用性，尤其适用于质量相对较差的标本，回收率高，但操作方法复杂，技术要求高，费时且成本高，并对精子有一定的损伤。这3种处理方法各有优缺点，根据表1数据可知，由这3种方法所获得的卵子受精率基本一致，在工作中应根据标本质量及实际工作条件来选取合适的处理方法。 1