抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞作用前后基因表达谱探究.docVIP

抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞作用前后基因表达谱探究【摘要】 目的 研究抗癌活性肽对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞作用前后的基因表达谱，筛选与抗癌活性肽作用相关的基因表达改变。方法 将1152条人类全长基因的PCR产物按微矩阵排列点样于特殊处理的玻片上制备成表达谱芯片；按一步法抽提抗癌活性肽作用前后体外培养的胆囊癌细胞的RNA并纯化mRNA，通过逆转录用两种荧光Cy3-dUTP和Cy5-dUTP标记对照和实验组胆囊癌细胞cDNA，制成cDNA探针并与表达谱芯片杂交，用ScanArray4000扫描仪扫描芯片上两种荧光信号，计算机分析判定差异表达的基因。结果 在1152条基因中筛选出有差异表达的基因245条，其中上调的121条，下调的124条。结论 利用本基因表达谱芯片可同时研究数以千计的基因表达水平，从而在基因水平上探讨抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞作用的机制。 【关键词】 抗癌活性肽；胆囊癌；细胞系；基因芯片；基因表达谱 Analysis of gene expression pattern in gallbladder carcinoma cells treated by anti-cancer bioactive peptide (ACBP) YUN Qiang，SU Xiu-lan，OU YANG Xiao-hui.Inner Mongolia Hospital，Inner Mongolia 100027，China 【Abstract】 Objective To investigate gene expression pattern of human gallbladder carcinoma cell line treated by anti-cancer bioactive peptide (ACBP)，and in the identification of novel cance rassociated genes.Methods The cDNA retro-transcribed from equal quantity mRNA from the gallbladder carcinoma cell line (GBC-SD) which were labeled with Cy5 and Cy3 fluorescence as a probes.The mixed probe was hybridized with cDNA microarray which representing a set of 1152 human genes.It was scanned by laser scanner.The acquired image was analyzed by software.Results 245 differentially expressed genes were identified that further identified 121 upregulated and 124 downregulated gene.Conclusion cDNA microarray for analysis of gene expression patterns is a powerful method to identify nove cancer as sociated genes. 【Key words】 Anti-cancer bioactive peptide (ACBP)；Gallbladder carcinoma；Cell line；Gene chip；Gene expression pattern 本研究将通过基因芯片技术比较分析抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞的基因表达谱的影响，了解作用前后基因表达的变化，深入探讨这种新型生物活性制剂的分子机制，为肿瘤治疗提供新方法。 1 材料与方法 1.1 细胞株 人胆囊癌GBC-SD细胞由山东大学齐鲁医院肿瘤研究所保存并提供。 1.2 主要试剂与耗材 1.2.1 细胞培养相关试剂 1.2.2 细胞总RNA提取、分析试剂 1.2.3 基因芯片标记、杂交试剂盒 上海博星(BioStar)基因芯片有限责任公司。 1.3 实验方法 1.3.1 细胞培养与药物作用 胆囊癌细胞按适当密度接种于培养瓶内常规培养，当达到80%融合时，加入活性肽使终浓度达到8 mg/ml继续培养48 h开始有形态的改变时终止。 1.3.2 探针制备 用改进的Trizol试剂一步法抽提培养细胞总RNA。 1.3.3 芯片杂交洗涤 按杂交试剂盒说明操作。 1.3.4 检测与分析