荔枝核提取液抗小鼠体内FM1流感病毒作用.docVIP

荔枝核提取液抗小鼠体内FM1流感病毒作用[摘要]目的：研究荔枝核提取液对甲1型流感病毒鼠肺适应株的影响。方法：用病毒滴鼻感染小鼠建立病毒感染小鼠模型，观察肺指数、病毒致小鼠死亡率。停药后处死小鼠，取各组小鼠肺组织光镜和电镜观察。结果：荔枝核高、低剂量组对小鼠流感病毒性肺炎均有抑制作用，对流感病毒感染小鼠有明显的死亡保护作用。在光镜与电镜观察下，正常对照组小鼠肺组织形态学未发生改变，病毒模型组肺组织明显出现充血、变性、白细胞浸润等现象，治疗组肺组织充血等现象明显轻于模型组。结论：荔枝核提取液在小鼠体内具有抗FM1流感病毒的作用。 [关键词]荔枝核提取液；甲1型流感病毒鼠肺适应株；抗病毒作用 [中图分类号]R285.5　[文献标识码]A　[文章编号]1007-8517(2011)09-0034-03 荔枝核为无患子科植物荔枝(Litchi chinensis Soma.)的干燥成熟种子，主产于我国广东、广西、福建、四川和台湾等地区。又名荔仁、荔核、大荔核。其味甘、涩、微苦，性温，归肝、肾经。具有行气散结、祛寒止痛的作用。近年来有文献报道荔枝核有抗乙肝病毒、保肝、降血糖、调血脂、抗氧化等作用。水提取物及黄酮类化合物体外实验证明对乙型肝炎病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。但目前笔者尚未见国内外有荔枝核提取液在体内抗流感病毒作用的相关报道。本实验研究荔枝核黄酮类提取液体内抗鼠肺适应株FM1甲1型流感病毒的作用，并对其进行了初步探讨。 1、材料 1.1动物NIH小鼠，雌雄各半，体重14－16g，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，动物质量许可证号：SCXK(粤)2008―0002。饲养环境：室温为23±2℃，相对湿度为75±10％，用标准鼠料及水饲养。 1.2毒种甲1型H1N1流感病毒FM1鼠肺适应株，由中国药品生物制品检定所提供，经鸡胚尿囊腔传代增强毒力后，测定其半数致死量LD50＝10-3.7。 1.3药物荔枝核提取液，由广州中医药大学青蒿中心药学研究室提取配制。利巴韦林(Ribavirin)，广东肇庆星湖生物化学制药厂，批号：L051075。 2、方法 2.1半数致死量的测定病毒经过11日龄鸡胚传代1次，测定尿囊液中病毒效价为1：160，以10倍递减稀释成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6”，分别滴0.05mL感染小鼠，每组5只，逐日观察记录动物死亡数，24h内死亡者不计；直至感染后14d为止，死亡小鼠解剖观察肺脏病理变化，以确定其死亡由于流感病毒感染所致。用Reed－Muench法计算其LD50为10-4.5。 2.2荔枝核提取液对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用取NIH小鼠80只，体重14－16g，雌雄各半，随机分为5组，每组16只。第1组为正常对照组、第2组为病毒对照组，第3组为利巴韦林阳性药物组，第4－5组分别为荔枝核高、低2个剂量组。各组动物于感染前一天开始灌胃给药，每天1次，给药10d，利巴韦林组给予药物0.075g/kg，荔枝核高、低剂量组分别按照剂量为0.3g生药/kg，0.1g生药/kg给药，正常对照组和病毒对照组分别灌胃等体积蒸馏水。于给药第2d，将小鼠(第1组除外)在乙醚轻度麻醉下接种8LD50的流感病毒0.05mL/只。连续观察14d，记录小鼠死亡数(接种病24h内死亡的小鼠不记入死亡数中)，为死亡者于第15d处死解剖，计算死亡率、死亡保护率、生命延长率，平均存活时间。 死亡保护率(％)＝对照组病死率－实验组病死率。 生命延长率(％)＝[(给药组平均存活日数－对照组平均存活日数)/对照组平均存活日数]×100％ 2.3对小鼠流感病毒肺炎的抑制作用将小鼠按体重随机分为正常对照组、病毒对照组、利巴韦林组、荔枝核高、低剂量组，共5组，每组10只，雌雄各半。利巴韦林组，荔枝核高低剂量组，给予相应剂量药物，分别为0.075昏/kg、0.3g/kg、0.1g/kg，正常对照组、病毒对照组给予等体积蒸馏水，除正常对照组外，其它各组小鼠在乙醚轻度麻醉下，以15LD50病毒液滴鼻感染，每鼠0.05mL。于感染前一天开始灌胃给药，每天1次，每次0.1mL/10g，连续5d。于第6d禁食4h，小鼠称重，颈椎脱臼处死，解剖取肺脏，用生理盐水洗净，并用干净滤纸吸掉残余盐水，称重，计算肺指数及肺指数抑制率。 肺指数＝(小鼠肺重/小鼠体重)×100％ 肺指数抑制率＝[(对照组平均肺指数一实验组平均肺指数)/对照组平均肺指数]×100％ 2.4荔枝核提取液对小鼠肺炎治疗作用的光镜观察取 2.3中各组别小鼠肺组织，10％甲醛固定，石蜡包埋，5μm切片进行常规HE染色，光镜下观察。 2.5荔枝核提取