人骨髓基质细胞培养及向成骨细胞的诱导分化.PDF

中国骨质疏松杂志 年 月第 卷第 期 ， ， ， #O 4 !N 4 60’- P D+*1191+ F9’( #O Q1( !N R1 S4 #LN ·论著· 人骨髓基质细胞培养及向成骨细胞的诱导分化 杨林 陶天遵 刘忠厚 摘要：目的 研究人骨髓基质细胞体外培养及向成骨细胞诱导分化的实验方法。方法 采用梯度离 心法获得人骨髓基质细胞，细胞纯化后使用分化培养液将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化。 通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法，确定细胞的功能状态和分化程度。 结果 显微镜观察显示获得的人骨髓基质细胞生长状况良好，生化指标稳定；经分化培养液培养的细 胞增殖速度明显减慢，生长状态平稳。细胞在分化培养过程中，上清液中碱性磷酸酶分泌量明显增 加，细胞碱性磷酸酶染色明显浓染，随时间呈显著增强趋势；采用常规培养液培养的骨髓基质细胞，在 汇合后不能形成明显的矿化结节。用分化培养液培养的人骨髓基质细胞，在 !4 5 时开始出现矿化结 节，在#! 5 时呈现密集的茜素红染色矿化结节。结论 梯度离心法获得的人骨髓基质细胞生长情况 良好，功能状态稳定；体外培养的人骨髓基质细胞在一定条件下可以向成骨细胞方向诱导分化，并具 有良好的成骨细胞功能特征，可以满足进一步研究的需要。 关键词：人；骨髓基质细胞；成骨细胞；细胞培养；分化 ! ， !#$% #$’( )*’#$+ ,-++) ,+*- $%. ./00--%*/$*/%1 /%*’ ’)*-’2+$)*) ! #!$% !#$ %’ () ! ， ， ， (*’+,’ %-. /01’201, 2 345 *6784’7 19 )67015 *4:; =4 ’2 ?0*1 !*’2 @15 7*A 99 A*74: 71 ?*5 7*A B4:;*A .’C467D ， ， =4 ’2 !# 60’- ： （ ） 32)*$,* 425-,*/6- 71 18+*9:* -5 -(,;* 0* *=*9’%*-( 31-5’’1- 1? 0@%- %991A +91%( 3*((+ 0BC6 （ ） 3@(@9* -5 5’??*9*-’’-. ’-1 0@%- 1+*18(++ 0DE ’ C761 2 7-*8’.) 70* 0BC6 A*9* 18’-*5 ?91% 81-* %991A +*3’%*-+ 8, .95’*- 3*-9’?@.’1- %*015 2 70*- 0* 3*((+ A*9* ’-3@8*5 A’0 5’??*9*-’’1- %*5’@% -5 5’??*9*-’*5 (1-. 0* 0DE 0A, 2 B1901(1., 18+*9:’1-，8’130*%’3( 5**3’1- -5 3*((+ +’-’-. A*9* *9?19%*5 5@9’-. 0BC6 5’??*9*-’’1- ’ C761 2 9-)+*) 70* +@9:’:( 31-5’’1- 1? 0* 0BC6 A+ .115 8, %1901(1.’3( 18+*9:’1- -5 8’130*%’+9, ’-5*=*+ A*9* +8(* 2 70* *=*9’%*-( 5 5*%1-+9*5 0 FGH +*39*’1- 1? 5’??*9*-’*5 0BC6 ’-39*+*5 +’.-’?’3-(, 31%9*5 A’0 @