反义hTERT寡核苷酸对人舌鳞癌细胞凋亡影响.docVIP

反义hTERT寡核苷酸对人舌鳞癌细胞凋亡影响【摘要】目的:将反义hTERT基因导入口腔鳞癌Tca8113细胞,观察其对细胞生物学行为的影响,探讨hTERT作为靶点治疗舌癌的可行性。方法:以正义寡核苷酸组、空载体组各浓度组和空白培养基组Tca8113细胞为对照,通过MTT试验、细胞DNA ladder检测、逆转录聚合酶链反应检测、细胞凋亡检测、细胞周期检测、统计学分析反义hTERT寡核苷酸对人舌鳞癌细胞凋亡的影响。结果:实验组与对照组之间细胞凋亡率、细胞周期S期比率均有统计学意义(p0.05)。结论:hTERT的反义寡核苷酸能明显抑制Tca8113细胞增殖和诱导细胞凋亡。 【关键词】鳞状细胞癌;端粒酶逆转录酶(hTERT);Tca8113细胞;细胞凋亡 The effect of antisense oligodeoxynucleotides against hTERT on apoptosis of human tongue squamous cell carcinoma LIU Zhihui?1CHEN Shunyue?1 WANG Huiming?2 【Abstract】Objective: To investigate the effect of antisense oligodeoxynucleotides against hTERT on apoptosis of human tongue squamous cell carcinoma.Method: Tca8113 cells in culture medium were treated with different concentrations of antisense oligedeoxynucleotide of hTERT, were detectd by MTT assay, FCM analysis, DNA ladder test, RT-PCR. Sense oligedeoxynucleotide ofhTERT, blank carrier, and blank cuture medium respectively were served as control groups. Results: The P values of the ratio of cell apoptosis and the S phase of cell cycle were less than 0.05 between the experimental group and control groups, both of the P valueswere considered significant (p 2.5 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tca8113细胞中CyclinD1和Bcl-2 mRNA 的表达采用RT-PCR法。 用TRIZOL溶液提取细胞总RNA。 温度循环按表中进行。 经2.0%的琼脂糖,将PCR产物10μL,在电压为100V的条件下电泳30min。紫外线下观察并经Kodak Digital系统成像。将目的基因条带与β-actin条带的密度扫描值比值作为目的基因的表达相对水平。 2.6 细胞凋亡检测。调整待测细胞的浓度为5×105-1×106个/mL,700rpm,4℃离心5min,按 AnnexinV-FITC检测试剂盒说明分别加入Binding Buffer、AnnexinV 和5μLPI,避光室温反应15min,在1h内上机检测。 2.7 细胞周期检测。待测样本制成单细胞悬液,用预冷的70%冷乙醇固定,过夜,加入RNase A(终浓度为20μg/mL),37℃孵育30min,重悬于1mL PI染液(终浓度为50μg/mL),4℃避光1h,上机检测,资料用cell Quest细胞周期分析软件处理。 3 统计学处理 所得实验数据以均数±标准差表示,所有数据应用SPSS11.0 for windows统计软件进行处理,组间差异比较采用ANOVA单因素方差分析,以P0.05。 4.5 流式细胞仪法检测Tca8113细胞周期。如表3所示,反义寡核苷酸组细胞G0/G1期细胞比率上升,S期细胞比例下降,说明细胞在反义寡核苷酸作用下,细胞周期阻滞在G0/G1期,与正义寡核苷酸组、空载体组和空白培养基组比较有差异(P0.05。 5 讨论 近年来,端粒酶与恶性肿瘤的高度相关性引起人们的极大兴趣,成为肿瘤领域的研究热点之一。新近较多研究表明抗hTERT能够抑制肝癌、肺癌、白血病和前列腺癌等恶性肿瘤的生长[6~9]。然而,有关抗端粒酶途径治疗口腔鳞癌目前鲜有