试验简单染色法.PPT

微生物實驗　李丹昂　編著 微生物實驗　李丹昂　編著 實驗2　簡單染色法 第11章 目的 原理 材料與儀器 步驟與方法 實驗注意事項 實驗結果 目的 學習如何將微生物進行玻片塗抹製成樣本，並藉由進行細菌的簡單染色法及陰性染色法之方式，來觀察微生物之菌體形態，藉以了解微生物染色之目的及原理。 原理 細菌個體小且顏色透明，因此觀察細菌時往往必須藉助染色法使菌體著色，以利細菌構造的顯現，方可使用顯微鏡進行觀察。簡單染色法為細菌染色中基本之染色方法，其原理主要利用細菌在一般環境中帶有負電荷，藉此使用具強烈結合性的正電荷之鹽基性染料如甲基藍、結晶紫、孔雀綠、番紅等單一性染劑進行染色，使細菌著色，此種方法又稱為直接染色法。 陰性染色法與簡單染色法相反，其原理為利用帶有負電荷的酸性染料如墨汁及尼羅辛染劑進行染色，由於菌體本身帶負電之關係，會與負電荷的酸性染劑互相排斥，故菌體並不會染上顏色，因此未經染色之細菌即可藉由染色後之背景而顯現出來，藉此觀察其大小與型態，由於此種染色之方法並非針對細菌菌體本身而是針對其背景進行染色，故又稱為間接染色法。 材料與儀器 菌種 染色劑 設備儀器及其他用具 菌種 大腸桿菌(Escherichia coli) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 染色劑 結晶紫 (Crystal Violet) 0.3% 甲基藍(Methylene Blue) 設備儀器及其他用具 光學顯微鏡 酒精燈 載玻片 接種環 蒸餾水 染色架 濾紙 75%酒精 乳頭滴管 步驟與方法 簡單染色法 簡單染色法 此染色方法之操作流程如下： 玻片樣本製作：玻片樣本製作有以下4步驟： 玻片準備：取一片載玻片，先以肥皂或是清潔劑洗淨，再浸泡於75%酒精中備用。 玻片塗抹：取出浸於75%酒精中之玻片，待其風乾後迅速通過酒精燈2~3次。接著以乳頭滴管吸取蒸餾水滴1~2滴於玻片上，並將已滅菌冷卻後的接種環沾取上述兩種樣本菌（圖3-1），將菌體與玻片上之無菌水相互混合均勻至混濁（圖3-2）。 乾燥：將玻片置於無菌操作台內自然風乾。 固定：將風乾後的玻片塗抹面向上，並迅速來回通過酒精燈上之火焰2~3次，以使菌體牢固的固定於玻片上後備用（圖3-3）。 染色：將製備完成之玻片樣本置於染色架上，於塗抹有菌體之處滴上1~2滴之結晶紫，靜置約20秒，以使菌體上色（圖3-4）。 水洗：待時間到後，將玻片之染色塗抹面向下，以蒸餾水緩慢沖洗掉多餘的染液，直到沖洗之液體透明無色為止（圖3-5）。 乾燥：將玻片上多餘的水分輕輕甩乾，並利用濾紙將其吸乾，接著置於無菌操作台內使其自然風乾後備用（圖3-6）。 鏡檢：先以低倍數光學顯微鏡找出菌體，然後再逐步換成高倍數接物鏡，最終以油鏡進行菌體的觀察並繪圖記錄之。 實驗注意事項 進行細菌的染色時，樣本於玻片上之塗抹務求均勻，以免影響染色的效果。 無論進行任何染色法時，染色前皆必須先確定玻片樣本呈現乾燥之狀態方可進行染色，否則易影響實驗之最終結果。 實驗結果 請畫出以簡單染色法觀察之菌體。 － THE　END － 回目錄 微生物實驗　李丹昂　編著 微生物實驗　李丹昂　編著