三种美白剂的酪胺酸酶抑制动力学研究-弘光科技大学.PDF

．弘光學報54 期． 三種美白劑的酪胺酸酶抑制動力學研究 邱嘉玲 徐照程＊ 弘光科技大學化妝品科技研究所 收到日期：97.7.29　 修訂日期：97.9.15　 接受日期：97.9.16 摘要 本研究採用酵素動力學法 ，探討 α-Arbutin 、β-Arbutin與AA-2G 三種皮膚美 白劑對酪胺酸酶 活性的抑制機轉與能力 。由動力學實驗結果得知 ：三種美 白劑皆會降低酪胺酸酶與酪胺酸之間的 親和力 ，α-Arbutin的Michaelis-Menten常數Km(0.275 mM)大於 β-Arbutin(0.155 mM) ，AA-2G(0.146 mM)及無美 白抑制劑存在之K 值(0 .076 mM) ，較大的K 值 ，代表 α-Arbutin較強之酪胺酸酶活性 m m 抑制能力 ，此傾向亦與抑制50%酵素活性之濃度(IC50)的結果( α-Arbutin(1.09 mM) β-Arbutin(13.3 mM)AA-2G( 17.6 mM)) ，以及酵素抑制劑複合物(EI)之解離常數(Ki)的研究結果( α-Arbutin(0.039 mM) β-Arbutin(0.05 1 mM))相符 。另進一步由Lineweaver-Burk 雙倒數圖形與最高反應速率(V )的 max 結果分析 ，可判斷 α-Arbutin與 β-Arbutin 傾向競爭型抑制機轉 ，AA-2G則傾向為混合型抑制機轉 。 關鍵詞：酵素動力學 、酪胺酸酶 、Lineweaver-Burk 圖 、維生素C葡萄醣苷 、熊果素 、美白 ＊通訊作者 115 ．三種美白劑的酪胺酸酶抑制動力學研究． 壹、前言 酪胺酸酶屬於結構複雜的含銅氧化還原酶 ，廣泛存在各類生物體 中 ，也是人類皮膚 中催化 黑色素生合成反應 的關鍵酶1 。化妝品中的美 白成分 ，多訴求於酪胺酸酶 的抑制劑能力2 。其 中 熊果素 （Arbutin ，Hydroquinone-D-glucopyranoside ，結構如圖 1 a. b . ）為對苯二酚的酚類配醣 體(Phenolglycosides) ，其美 白機轉是藉由與酪胺酸競爭酪胺酸酶使其失去活性的方式 ，降低多巴 (Dopa)轉化成多巴 (Dopaquinone) ，減少黑色素生成 ，而達到美 白效果 ，目前常被使用於美 白效果 的熊果素有 α及 β兩種型態 ，曾有研究指出 α型的美 白效果與穩定性優於 β型3-4 。另一美 白成分為 維生素C-2-葡萄醣苷 （Ascorbic acid-2-glucoside ，AA-2G 結構如圖 1 c. ） ，是維生素C安定的衍生 5 物 ，能在進入皮膚後水解釋出維生素C ，達到抑制黑色素生成 。 酵素動力學是探討酵素對化學反應的催化行為 ，尤其是在基質(Substrate)濃度 （【S 】）對反 應速率(V)的影響6 。藉由動力學的結果 ，可以了解酵素的催化機轉 ，及藥物如何抑制其活性 。酵素 的兩個重要動力學性質分別為酵素達到飽和所需的 【S 】與最高反應速率(Vmax) 。酵素動力學的發 展根基於 Michaelis-Menten的 “過渡狀態濃度 （【ES 】）恆定＂(Steady state)理論 ，依酵素(E)與基 質