周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖及基质金属蛋白酶-2影响.pdfVIP

摘要 摘要 marrow 目的研究周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem 2， cells，BMSCs)增殖活性及基质金属蛋白酶一2(matrixmetalloproteinase MMP．2)的影响，探索影响BMSCs增殖的最佳力学参数，达到大量扩增的目的。 方法密度梯度离心法分离培养新西兰大白兔BMSCs，取生长良好的第3代细胞， 按4×104个／孔接种于6孔板，设立5组：5．32 kPa kPa，10．64kPa，21．28kPa，29．26 kPa=7．5 (1 mmng)压力组、对照组(正常大气压培养)。分别给予对应的压力培养， h×3 每日加压6 d；正常培养组细胞只接受正常大气压刺激，不予额外加压。通 过四甲基偶氮唑(MTT)比色试验，流式细胞仪(flowcytometer,FCM)鉴定细胞表 面抗原阳性表达及检测细胞增殖周期，同时收集培养液作MMP．2质量浓度检测。 观察不同周期性压力对BMSCs增殖及姗P一2的影响。 结果6h／d压力干预BMSCs，3d后细胞形态无异常变化，呈集落样生长。随着 压力的增加，细胞吸光度值逐渐升高，以21．28kPa压力组最高，但升高至29．26 21．28 kPa压力组细胞周期发生改变，增殖指数(proliferationindex，PI)均明显升高 kPa压力组PI则明显下降。细胞培养上清液MMP．2 (尸0．05或O．01)，但29．26 质量浓度以21．28kPa压力组最低，29．26kPa压力组最高，组间比较差异有显著 性意义(t=213．214，P0．001)。 结论5．32--21．28kPa的周期性压力可以提高BMSCs的增殖能力，特别是21．28 kPa压力刺激促增殖作用尤为明显，并降低培养液中的MMP．2的浓度。但压力 过高则抑制细胞增殖，培养液中的MMP一2的浓度升高，导致细胞死亡增多。 关键词：骨髓间充质干细胞；增殖；压力培养；细胞周期；基质金属蛋白酶．2 lI abstract ABSTRACT WetO theeffectsof cultureon objective study cyclicalpressure proliferation，cell try andmatrix boneinalTOW stem cycle metalloproteinase2(MMP-2)of mesenchymal thebestmechanics onthe ofBMSCs cells(BMSCs)，toget parametersproliferation andtoobtaina numberof large amplification． MethodsNew rabbitBMSCswereinvitroisolatedthe Zealand by densitygradient thethird wereincubatedina6-well o珥 centrifugation．Atpassage，cells plate，4×1 cellswell．Cellswere into