HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质.doc

HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质[摘要] 目的：建立测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的高效液相色谱法。方法：采用ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（用磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（90∶10）为流动相，流速1.0 ml/min，于225 nm波长处测定。结果：在本色谱条件下，2种有关物质均能得到较好的分离，且在测定范围内有较好的线性及精密度。结论：采用HPLC法测定甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的方法简便、准确、灵敏度高，方法可靠，可用于甘氨酰-L-谷氨酰胺有关物质的测定。 [关键词] 甘氨酰-L-谷氨酰胺；有关物质；高效液相色谱法 [中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）04（b）-042-02 Determination of two related substances in glycyl-L-glutamine by HPLC LIU Wen-ping [Abstract] Objective: To establish a HPLC method for determination of two related substances in glycyl-L-glutamine. Methods: The separation was performed with a C18 ODS column (4.6 mm×250 mm, 5μm) ; the mobile phase consisted of 0.05 mol/L sodium dihydrogen phosphate (adjust pH value to 3.0 with phosphoric acid)-methanol(90∶10); the flow rate was 1.0 ml/min; the detection wavelength was set at 225 nm.Results: In this chromatography system, two related substances had a good separation and a good linear relationship over the determination concentrations. Conclusion: This method is simple,accurate,sensitive and applicable for related substances determination of glycyl-L-glutamine. [Key words] Glycyl-L-glutamine; Related substances; HPLC 甘氨酰-L-谷氨酰胺为二肽类氨基酸类，是复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中的主要成分之一。它作为体内的氮源运载工具，在组织与小肠细胞、结肠细胞淋巴细胞及再生细胞间穿梭，一方面清除氨等代谢废物，另一方面为蛋白质和DNA的合成提供氮源，主要用于创伤、败血症和某些器官衰竭危重患者。因本品是以L-酪氨酸为原料，经系列反应制得甘氨酰-L-谷氨酰胺。样品中杂质可能来源于原料、中间体、降解产物及生产过程中，根据对合成中相关杂质进行定性，发现产品中主要杂质为焦谷氨酸、环（甘氨酰-L-酪氨酸）。参考化学药物的杂质检查要求[1]，且鉴于高效液相色谱法有较高的灵敏度、专属性强、易于量化的优点，我们决定采用高效液相色谱法[2]对本品的有关物质进行测定研究，参考文献[3]中液相条件，经过数次试验筛选，最终确立了色谱条件，并进行了方法学验证。 1 仪器与试药 LC-2130泵，LC-2050高效液相色谱仪，LC-2030紫外检测器（上海天美科学仪器有限公司）；磷酸二氢钠，磷酸均为分析纯；甘氨酰-L-谷氨酰胺对照品（批号：060201，自制）；甘氨酰-L-谷氨酰胺样品（批号：060213，自制）；环（甘氨酰-L-酪氨酸）对照品（批号：060210，自制）；焦谷氨酸对照品（批号：060215，自制）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.05 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（用磷酸溶液调节pH至3.0）-甲醇（90∶10）；流速为1.0 ml/min，检测波长为225 nm；柱温为室温；进样量为20 μl，用外标法进行定量。在本色谱条件下，甘氨酰-L-谷氨酰胺与环（甘氨酰-L-酪氨酸）及焦谷氨酸均得到较好分离。结果见色谱图1。