复方虎黄搽剂抗炎镇痛实验探究.doc

复方虎黄搽剂抗炎镇痛实验探究【摘要】目的：研究复方虎黄搽剂的抗炎镇痛作用。方法：通过巴豆油致小鼠耳廓肿胀试验、角叉菜胶致大鼠足肿胀试验观察复方虎黄搽剂的抗炎作用，并测定角叉菜胶致大鼠足肿胀炎性渗出物中前列腺素E2（PGE2）的含量；通过小鼠热板致痛试验，观察其镇痛作用。结果：复方虎黄搽剂能明显减轻小鼠耳肿胀及大鼠足部肿胀反应(P0.01)，并可降低大鼠角叉菜性炎性渗出液中的PGE2的含量；其可显著延长小鼠疼痛反应时间。结论：复方虎黄搽剂具有较好的抗炎和镇痛作用，其机制可能与其抑制PGE2的产生和释放有关。 【关键词】复方虎黄搽剂；抗炎；镇痛 复方虎黄搽剂为我院临床经验方，由虎杖、大黄和细辛组成，具有清热消炎、凉血止痛的作用，临床用于烧伤、烫伤等相关疾病，疗效肯定。我院在多年临床安全有效使用的基础上，进行了制剂研究，并对复方虎黄搽剂的生产工艺、质量标准进行了研究制定。本研究主要观察其抗炎镇痛作用[1]。 1 材料 1.1 药物与试剂：复方虎黄搽剂：安徽省蚌埠市第三人民医院制剂中心提供，批巴豆油：辽宁药物研究所生产；角叉菜胶：Sigma公司出品；消炎痛：武汉制药厂生产，批号060307，临用时配成含药0.01g/ml的溶液。 1.2 动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18-22g，动物合格证号：皖动字第P0010100号； Wistar大鼠，雄性，体重180-220g，动物合格证号：皖动字第；均购自安徽省医学科学研究所。 1.3 仪器：AE-240型电子分析天平：瑞士Mettler公司；752型紫外分光光度计：上海天普分析仪器公司。 2 方法 2.1 对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响[2]：取雄性小鼠50只，随机分为5组，分别为空白对照组（蒸馏水组）、消炎痛组（阳性对照组），复方虎黄搽剂低剂量组18.7%、中剂量组37.4%、高剂量组56.1%，每组10只。均按0.1ml/耳，涂搽左侧耳廓，每天3次，连续3天，末次给药后30min，给小鼠左耳涂2%的巴豆油溶液，右耳为对照；3小时后断颈处死动物，沿耳廓基线剪下双耳，于同一部位用打孔器冲下圆耳片（直径8mm），分别称重，以其差值作为炎性肿胀程度，并计算其抑制百分率。 2.2 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响[3]：取雄性大鼠50只，随机分为5组，分别为空白对照组（蒸馏水组）、消炎痛组（阳性对照组），复方虎黄搽剂低剂量组18.7%、中剂量组37.4%、高剂量组56.1%，每组10只。均按0.1ml/足，涂搽右足跖部，末次给药前用千分尺测量右后足跖厚度，给药后1h，于右足跖部皮下注射1%角叉菜胶0.15ml ，分别测量致炎后1、3、5h后的右后足跖厚度；以致炎前后足跖厚度之差表示其肿胀度。 2.3对角叉菜胶所致大鼠炎性肿胀组织内前列腺素E2(PGE2)含量的影响[4]：动物分组操作同2.2在最后一次测定后，处死动物，在踝关节上1cm处剪下炎性肿胀足跖，称重。剪碎后加5ml生理盐水研磨成匀浆液，离心。取上清液0.3 ml，加入2 ml 0.5mol/LKOH,56℃水浴异构化20 min，加甲醇5 ml，紫外分光光度仪(278nm)处测PGE的光吸收值，标准曲线上计算出PGE2的含量［5］。 2.4 对小鼠热板法致痛实验的影响［6］：取雌性小鼠若干，实验前将小鼠逐只置于(55±0.5)℃ 热板仪 ，测定记录小鼠的痛阈值(以出现舔后足反应为观察指标)，挑选痛阈值在5～30s内的小鼠50只。分别为空白对照组（蒸馏水组）、消炎痛组（阳性对照组），复方虎黄搽剂低剂量组18.7%、中剂量组37.4%、高剂量组56.1%，每组10只。各组分别给予0.1mL/足涂搽，间隔30min，连续3次。各组分别于给药前30min，最后一次给药后30min测定痛阈值（如小鼠在热板上停留60s后仍无痛反应，按60s计算），并计算各组小鼠痛阈提高百分率。 2.5 统计学处理：采用SPSS11.5统计软件进行数据分析，实验数据均以名±s表示，角叉菜胶致大鼠足肿胀实验数据采用重复测量资料的方差分析法；热板实验数据采用随机区组设计的方差分析法；其余实验数据比较用单因素方差分析，组间比较用LSD-t 检验 3 结果 3.1 对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响：复方虎黄搽剂中、高剂量组能不同程度的抑制小鼠耳肿胀度（见表1），与空白对照组比较有显著性差异（*P＜0.05，**P＜0.01）。 表1 复方虎黄搽剂对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响（ｘ±s ,n=10） 注：与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01 3.2 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响：复方虎黄搽剂低、中、高剂量组均能不同程度的抑制大鼠足趾肿胀（